附件：凝血酶原時(shí)間/活化部分凝血活酶時(shí)間/凝血酶時(shí)間/纖維蛋白原檢測(cè)試劑產(chǎn)品注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（2021年第104號(hào)）.doc

凝血酶原時(shí)間/活化部分凝血活酶時(shí)間/凝血酶時(shí)間/纖維蛋白原檢測(cè)試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)凝血酶原時(shí)間/活化部分凝血活酶時(shí)間/凝血酶時(shí)間/纖維蛋白原（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“凝血四項(xiàng)”）檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫(xiě)，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門(mén)審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是針對(duì)凝血四項(xiàng)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供注冊(cè)申請(qǐng)人和技術(shù)審評(píng)人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評(píng)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿(mǎn)足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

凝血四項(xiàng)包括凝血酶原時(shí)間（prothrombin time，PT）、活化部分凝血活酶時(shí)間（activated partial thromboplastintime，APTT）、凝血酶時(shí)間（thrombin time，TT）和纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB），是臨床上常用的凝血功能檢查的檢測(cè)指標(biāo)，主要用于凝血障礙性疾病的初步診斷、抗凝藥物的治療監(jiān)測(cè)以及常規(guī)凝血功能的評(píng)估等。

從方法學(xué)考慮，本指導(dǎo)原則適用于基于血液凝固法原理，利用手工法、半自動(dòng)以及全自動(dòng)凝血分析儀（光學(xué)法、磁珠法），對(duì)人血漿樣本中的凝血四項(xiàng)指標(biāo)，包括凝血酶原時(shí)間（Quick一期法）、活化部分凝血活酶時(shí)間、凝血酶時(shí)間、纖維蛋白原（Clauss法），進(jìn)行體外定量檢測(cè)的試劑。不適用于床旁快速檢測(cè)（POCT）及口服抗凝藥治療自測(cè)體外監(jiān)測(cè)的試劑。

二、注冊(cè)審查要點(diǎn)

注冊(cè)申報(bào)資料的撰寫(xiě)應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求及說(shuō)明》的相關(guān)要求。

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱(chēng)

產(chǎn)品名稱(chēng)一般由三部分組成。第一部分：被測(cè)物質(zhì)的名稱(chēng)，如凝血酶原時(shí)間;第二部分：用途，如測(cè)定試劑盒;第三部分：方法或者原理，如凝固法等，本部分應(yīng)當(dāng)在括號(hào)中列出。

2.分類(lèi)依據(jù)

根據(jù)《體外診斷試劑分類(lèi)子目錄》，凝血四項(xiàng)檢測(cè)試劑管理類(lèi)別為二類(lèi)，分類(lèi)編碼為6840。

3.注冊(cè)單元?jiǎng)澐?/p>

從適用樣本類(lèi)型及方法學(xué)考慮，本指導(dǎo)原則所述凝血四項(xiàng)檢測(cè)試劑的注冊(cè)單元原則上按照單個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行劃分。不建議不同檢測(cè)項(xiàng)目的組合作為同一注冊(cè)單元。

各單項(xiàng)檢測(cè)試劑如包含不同的包裝規(guī)格，不同規(guī)格間僅試劑組分裝量或檢測(cè)數(shù)有差異，原則上劃分為同一注冊(cè)單元;如包含不同的包裝規(guī)格，不同規(guī)格間除試劑裝量或檢測(cè)數(shù)的差異外，適用于不同的儀器機(jī)型，原則上劃分為同一注冊(cè)單元。

校準(zhǔn)品、質(zhì)控品可以與配合使用的凝血四項(xiàng)檢測(cè)試劑合并申請(qǐng)注冊(cè)，也可以單獨(dú)申請(qǐng)注冊(cè)。

（二）綜述資料

主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史等內(nèi)容。其中，需注意以下內(nèi)容：

1.產(chǎn)品描述

1.1產(chǎn)品綜述

應(yīng)著重描述：1）產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理及適用儀器的檢測(cè)原理，如光學(xué)法（透射比濁法、散射比濁法）、磁珠法等;2）主要生物活性原料（如組織凝血活酶、激活劑、磷脂、凝血酶等）的生物學(xué)來(lái)源、供應(yīng)商名稱(chēng)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（同時(shí)附供應(yīng)商提供的出廠檢定報(bào)告）;3）組織凝血活酶的國(guó)際敏感指數(shù)（international sensitivity index，ISI）標(biāo)定情況;4）校準(zhǔn)品（如有）的量值溯源情況，質(zhì)控品（如有）的制備、賦值情況等。

1.2與同類(lèi)和/或前代產(chǎn)品的比較

應(yīng)著重從預(yù)期用途、主要組成成分（原材料生物學(xué)來(lái)源、激活劑類(lèi)型）、適用儀器檢測(cè)原理、標(biāo)準(zhǔn)化及溯源、主要性能指標(biāo)、參考區(qū)間等方面寫(xiě)明擬申報(bào)產(chǎn)品與境內(nèi)、外已上市同類(lèi)產(chǎn)品和/或前代產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

2.臨床適應(yīng)證

PT臨床上主要用于外源性凝血系統(tǒng)功能缺陷的篩查和口服抗凝劑治療監(jiān)測(cè)。PT對(duì)外源性和共同凝血途徑的凝血因子（Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ）的缺陷以及這些凝血因子抑制物的存在敏感，也是口服維生素K拮抗劑（如華法林）治療的首選監(jiān)測(cè)指標(biāo)。此外，PT還可用于彌散性血管內(nèi)凝血的檢測(cè)以及檢測(cè)肝臟的蛋白質(zhì)合成功能。臨床上PT結(jié)果的報(bào)告方式有：直接報(bào)告PT值（秒）、百分比活性（%）、凝血酶原時(shí)間比值（prothrombin time ratio，PTR）以及國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值（international normalized ratio，INR）。

APTT臨床上主要用于內(nèi)源性凝血系統(tǒng)功能缺陷的篩查和肝素抗凝治療監(jiān)測(cè)。APTT對(duì)內(nèi)源性凝血途徑（凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ，前激肽釋放酶和高分子量激肽原）和共同凝血途徑（因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ）的缺陷敏感，常用于臨床監(jiān)測(cè)普通肝素抗凝治療效果，還可用于其它病理類(lèi)型的凝血抑制物的篩查（如狼瘡抗凝物）。

TT臨床上主要用于反映血漿纖維蛋白原含量或結(jié)構(gòu)異常，如低（無(wú)）FIB血癥和異常纖維蛋白血癥時(shí)TT延長(zhǎng)或縮短，還可用于反映纖溶系統(tǒng)功能，如纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物的增高。

FIB 臨床上主要用于彌散性血管內(nèi)凝血、原發(fā)性纖溶癥的輔助診斷以及溶栓療效的監(jiān)測(cè)。增高見(jiàn)于糖尿病和糖尿病酸中毒、動(dòng)脈血栓栓塞（急性心肌梗死發(fā)作期）、急性傳染病、結(jié)締組織病、急性腎炎和尿毒癥、放射治療后、燒傷、休克、老年人外科大手術(shù)后、妊娠晚期和妊娠期高血壓病、輕型肝炎、敗血癥和急性感染等。減少見(jiàn)于彌散性血管內(nèi)凝血和原發(fā)性纖溶癥、重癥肝炎和肝硬化等，也見(jiàn)于降纖藥治療和溶血治療。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料

申請(qǐng)人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個(gè)環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯(cuò)誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見(jiàn)的危害等方面的判定以及對(duì)患者風(fēng)險(xiǎn)的估計(jì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析。（參照YY/T 0316《醫(yī)療器械風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械的應(yīng)用》）

2.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告

2.1產(chǎn)品技術(shù)要求

應(yīng)符合《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則》的相關(guān)規(guī)定。申請(qǐng)人可參照已發(fā)布行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)產(chǎn)品技術(shù)要求中性能指標(biāo)及檢驗(yàn)方法內(nèi)容進(jìn)行編寫(xiě)，同時(shí)應(yīng)當(dāng)符合適用的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)。（參照YY/T 1156《凝血酶時(shí)間檢測(cè)試劑（盒）》、YY/T 1157《活化部分凝血活酶時(shí)間檢測(cè)試劑（盒）》、YY/T 1158《凝血酶原時(shí)間檢測(cè)試劑（盒）》、YY/T 1159《纖維蛋白原檢測(cè)試劑（盒）》）

2.2產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告

應(yīng)提交按產(chǎn)品技術(shù)要求進(jìn)行檢驗(yàn)的檢驗(yàn)報(bào)告，可以是申請(qǐng)人的自檢報(bào)告，也可以是委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的檢驗(yàn)報(bào)告。檢驗(yàn)用產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)能夠代表申請(qǐng)注冊(cè)產(chǎn)品的安全性和有效性，其生產(chǎn)應(yīng)當(dāng)符合醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范的相關(guān)要求。有適用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的，應(yīng)當(dāng)使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)。

3.分析性能研究

申請(qǐng)人應(yīng)提交在符合質(zhì)量管理體系的生產(chǎn)環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行的所有性能評(píng)估驗(yàn)證的研究資料，對(duì)于每項(xiàng)分析性能的研究都應(yīng)包括研究目的、試驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)研究背景信息也應(yīng)在資料中有所體現(xiàn)，包括試驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)和臨床樣本來(lái)源等。分析性能評(píng)估的試驗(yàn)方法可以參考相關(guān)國(guó)內(nèi)或國(guó)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。

如申報(bào)產(chǎn)品適用不同的機(jī)型，需要提交在不同機(jī)型上進(jìn)行評(píng)估的資料。如申報(bào)產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對(duì)各包裝規(guī)格進(jìn)行分析或驗(yàn)證。

3.1樣本穩(wěn)定性

樣本穩(wěn)定性研究主要包括室溫、冷藏和冷凍條件下的有效期驗(yàn)證。有關(guān)樣本采集、處理、運(yùn)輸及保存等的詳細(xì)內(nèi)容，申請(qǐng)人可參考WS/T 359《血漿凝固實(shí)驗(yàn)血液標(biāo)本的采集及處理指南》或CLSI H21等相關(guān)文件，合理選擇樣本保存條件并通過(guò)試驗(yàn)進(jìn)行分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)樣本的效期穩(wěn)定性。

3.2適用的樣本類(lèi)型

用于分析性能評(píng)估用樣本應(yīng)為枸櫞酸鈉抗凝血漿樣本。血漿抗凝劑濃度為105mmol/L～109mmol/L（3.13%～3.2%，通常定為3.2%），與實(shí)際臨床檢測(cè)中使用的抗凝劑保持一致，不能使用其他抗凝劑（如草酸鹽、肝素或EDTA等）。樣本類(lèi)型包括新鮮樣本、冰凍血漿和凍干血漿。評(píng)估試驗(yàn)在樣本采集后規(guī)定時(shí)間內(nèi)不能完成時(shí)，推薦使用冰凍或者凍干血漿進(jìn)行評(píng)估，其中冰凍血漿又優(yōu)于凍干血漿。如果使用冰凍血漿，應(yīng)保存在-70℃以下，在-20℃保存超過(guò)2周即可使某些凝血因子失活，其結(jié)果不能和新鮮血漿比較。

3.3校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值（如適用）

應(yīng)提供詳細(xì)的產(chǎn)品溯源性研究資料，且檢測(cè)結(jié)果的量值應(yīng)溯源至現(xiàn)行的國(guó)家或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品。對(duì)于企業(yè)內(nèi)部參考血漿（制造商工作校準(zhǔn)品）、試劑盒產(chǎn)品校準(zhǔn)品應(yīng)提供詳細(xì)的賦值試驗(yàn)資料和溯源性文件等。如包含PT/INR標(biāo)定血漿，建議參照CLSI H54文件提供詳細(xì)的賦值和驗(yàn)證過(guò)程研究資料。質(zhì)控品應(yīng)提供在所有適用機(jī)型上的賦值及其靶值范圍確定的研究資料。

3.4 ISI標(biāo)定（PT適用）

對(duì)于PT試劑應(yīng)提供組織凝血活酶（適用于手工法）、組織凝血活酶/儀器特異性的ISI標(biāo)定的詳細(xì)研究資料，ISI應(yīng)通過(guò)與WHO凝血活酶國(guó)際參考品（international reference preparation，IRP）比較，并按照WHO指南標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量程序進(jìn)行標(biāo)定。（注：通常，由WHO國(guó)際參考品標(biāo)定企業(yè)內(nèi)部參考試劑ISI，再由企業(yè)內(nèi)部參考試劑對(duì)每一批次試劑進(jìn)行ISI標(biāo)定）。

3.5準(zhǔn)確度

針對(duì)本類(lèi)產(chǎn)品的準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)方法主要包括：與國(guó)家或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品的相對(duì)偏差、方法學(xué)比對(duì)等方法，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際情況選擇以下方法的一項(xiàng)或幾項(xiàng)進(jìn)行研究。

3.5.1相對(duì)偏差

用國(guó)家或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)試，重復(fù)測(cè)試多次，計(jì)算均值與標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)示值的相對(duì)偏差，所得結(jié)果應(yīng)符合相應(yīng)的接受標(biāo)準(zhǔn)。

3.5.2方法學(xué)比對(duì)

采用參考方法或國(guó)內(nèi)/國(guó)際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類(lèi)試劑作為比對(duì)方法，與擬申報(bào)試劑同時(shí)檢測(cè)一批臨床樣本，通過(guò)兩者的比對(duì)研究和偏倚估計(jì)，進(jìn)行申報(bào)試劑的準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)。其中，PT、APTT、TT評(píng)價(jià)樣本應(yīng)包含正常樣本及不同病理水平異常樣本，F(xiàn)IB樣本的選擇應(yīng)盡可能覆蓋其分析測(cè)量范圍并盡量均勻分布。PT試劑應(yīng)對(duì)聲稱(chēng)的每一種可報(bào)告方式進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)分析。

除進(jìn)行上述方法學(xué)比對(duì)外，PT、APTT試劑還需進(jìn)一步進(jìn)行試劑敏感性的評(píng)價(jià)，具體如下：

3.5.2.1 PT/INR

PT試劑預(yù)期用于口服抗凝劑的治療監(jiān)測(cè)時(shí)，應(yīng)選擇至少40例接受維生素K拮抗劑（如華法林）治療的患者樣本，其中INR2.0～4.5為30例，INR＜2.0為5例，INR＞4.5為5例，與已上市試劑或參考方法相比，位于治療區(qū)間（2.0～4.0）內(nèi)的85%樣本需滿(mǎn)足不超過(guò)±0.5INR單位的要求。

3.5.2.2 APTT

用于APTT試劑方法學(xué)比對(duì)的樣本包括正常樣本、接受普通肝素治療患者樣本、含狼瘡抗凝物樣本以及凝血因子缺乏的樣本。

APTT試劑預(yù)期用于普通肝素治療的監(jiān)測(cè)時(shí)，應(yīng)通過(guò)至少20例接受普通肝素治療的患者樣本進(jìn)行評(píng)價(jià)，樣本的選擇應(yīng)能覆蓋肝素的治療范圍，并注意避免使用體外模擬添加肝素的樣本。（注：申請(qǐng)人可參照CLSI H47文件推薦的方法建立監(jiān)測(cè)普通肝素治療的APTT參考區(qū)間。）

3.6精密度

影響精密度的條件包括：操作者、測(cè)量?jī)x器、測(cè)量程序、試劑批次（lot）、校準(zhǔn)（校準(zhǔn)品批次，校準(zhǔn)周期）、運(yùn)行（run）、時(shí)間、地點(diǎn)、環(huán)境條件（實(shí)驗(yàn)室溫度、濕度、空氣質(zhì)量、管理等）等。

針對(duì)本類(lèi)產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求：

3.6.1根據(jù)各測(cè)量條件對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響程度的分析設(shè)計(jì)試驗(yàn)方法，進(jìn)行重復(fù)性、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度、實(shí)驗(yàn)室間精密度、和批間精密度評(píng)價(jià)，應(yīng)對(duì)每項(xiàng)精密度指標(biāo)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。一般應(yīng)設(shè)定合理的評(píng)價(jià)周期，即在多天內(nèi)進(jìn)行測(cè)試，并在評(píng)價(jià)過(guò)程中考慮納入前述可能影響精密度的不同條件，不必對(duì)每個(gè)測(cè)量條件進(jìn)行單獨(dú)評(píng)估，可在試驗(yàn)設(shè)計(jì)中納入多個(gè)測(cè)量條件。

3.6.2精密度的評(píng)價(jià)應(yīng)至少選擇2～3個(gè)水平的血漿樣本進(jìn)行，一般來(lái)說(shuō)應(yīng)包含正常血漿、高值異常血漿等，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫蟆?/p>

3.6.3 PT試劑應(yīng)對(duì)聲稱(chēng)的每一種可報(bào)告方式進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)。

3.7定量限（FIB適用）

建議申請(qǐng)人參照國(guó)內(nèi)相關(guān)性能評(píng)估文件或CLSI EP17文件推薦的定義和設(shè)計(jì)方案，對(duì)申報(bào)產(chǎn)品的定量限（LoQ）進(jìn)行合理評(píng)估和驗(yàn)證。

3.8干擾物質(zhì)研究

對(duì)樣本中常見(jiàn)的內(nèi)源性干擾物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素等，確定可接受的干擾物質(zhì)極限濃度。

外源性干擾物質(zhì)通常包括常用藥物及其代謝物、患者群體使用的藥物及其代謝物等，建議申請(qǐng)人充分考慮已報(bào)道對(duì)類(lèi)似試劑或測(cè)量程序存在干擾的物質(zhì)，并根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)選擇潛在的干擾物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證。

干擾物質(zhì)研究的樣本可采用臨床或模擬添加樣本進(jìn)行驗(yàn)證，建議至少包含正常、異常/病理兩個(gè)水平的樣本。

3.9線(xiàn)性區(qū)間（linearity interval）（FIB適用）

線(xiàn)性區(qū)間的研究，需采用高值和低值樣本配制一系列不同濃度的樣本。當(dāng)建立試劑的線(xiàn)性區(qū)間時(shí)，需配制出較預(yù)期線(xiàn)性區(qū)間更寬的至少9個(gè)左右不同濃度的樣本，每個(gè)樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)，根據(jù)可接受線(xiàn)性偏差和各濃度的重復(fù)性，確定檢測(cè)次數(shù)。采用重復(fù)檢測(cè)均值和預(yù)期值進(jìn)行直線(xiàn)回歸分析，建議采用加權(quán)最小二乘回歸等分析方法，提供散點(diǎn)圖、線(xiàn)性回歸方程、線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)（r）及線(xiàn)性偏差，判斷結(jié)果是否滿(mǎn)足可接受標(biāo)準(zhǔn)。

當(dāng)驗(yàn)證試劑的線(xiàn)性區(qū)間時(shí)，需配制覆蓋整個(gè)線(xiàn)性區(qū)間的至少5個(gè)不同濃度的樣本，每個(gè)樣本至少重復(fù)檢測(cè)2次。

4.穩(wěn)定性研究

穩(wěn)定性研究主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開(kāi)瓶（在機(jī)）穩(wěn)定性及復(fù)溶穩(wěn)定性（如涉及）等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

5.參考區(qū)間確定資料

應(yīng)提交建立參考區(qū)間所采用樣本來(lái)源及詳細(xì)的試驗(yàn)資料。研究樣本來(lái)源應(yīng)覆蓋年齡、性別等因素，盡可能考慮樣本來(lái)源的多樣性、代表性。應(yīng)明確參考人群的篩選標(biāo)準(zhǔn)（如：未接受過(guò)藥物治療，且過(guò)去18～24小時(shí)內(nèi)未進(jìn)行過(guò)劇烈運(yùn)動(dòng)），研究各組（如性別、年齡等）例數(shù)通常應(yīng)不低于120例。（注：研究例數(shù)不低于120例是為了保證能正確估計(jì)參考限的90%置信區(qū)間。申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)預(yù)設(shè)的置信區(qū)間水平進(jìn)行樣本研究例數(shù)的選擇并符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。）

若引用針對(duì)中國(guó)人群參考區(qū)間研究的相關(guān)文獻(xiàn)，應(yīng)明確說(shuō)明出處，并進(jìn)行驗(yàn)證。

樣本應(yīng)采用新鮮樣本（室溫，4小時(shí)內(nèi)）和/或-70℃冷凍血漿，冷凍血漿應(yīng)在37℃水浴中迅速融化，輕輕混勻立即測(cè)定。

6.其他資料

6.1主要原材料研究資料（如需提供）

應(yīng)提交主要原材料的來(lái)源、篩選研究過(guò)程、制備過(guò)程、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及檢驗(yàn)資料等。如為申請(qǐng)人自制，應(yīng)提交詳細(xì)制備方法及過(guò)程，并應(yīng)保證工藝相對(duì)穩(wěn)定;如為外購(gòu)，應(yīng)注意明確原材料的供應(yīng)商，并應(yīng)提交供應(yīng)商提供的原材料質(zhì)量檢定報(bào)告。

6.1.1組織凝血活酶

組織凝血活酶的常見(jiàn)生物學(xué)來(lái)源有重組人組織因子、人胎盤(pán)、兔腦、牛腦等。如為外購(gòu)，應(yīng)詳述其名稱(chēng)、生物學(xué)來(lái)源、供應(yīng)商名稱(chēng)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等。

由于不同組織凝血活酶對(duì)凝血因子缺乏的敏感性不同。為了使不同敏感性的組織凝血活酶在檢測(cè) PT 中能得到同樣的結(jié)果，需提供組織凝血活酶ISI（適用于手工法）、組織凝血活酶/儀器特異性ISI。

6.1.2磷脂（部分活化凝血活酶）

磷脂的生物學(xué)來(lái)源有人、動(dòng)物、植物以及合成磷脂等。如為外購(gòu)，應(yīng)詳述其名稱(chēng)、生物學(xué)來(lái)源、供應(yīng)商名稱(chēng)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等。

需要注意的是，某些凝血活酶和部分活化凝血活酶并不一定與某些儀器相匹配。渾濁的或含微粒的凝血活酶和部分活化凝血活酶可能無(wú)法運(yùn)用通過(guò)光學(xué)系統(tǒng)測(cè)定終點(diǎn)的儀器進(jìn)行檢測(cè)。

6.1.3激活劑

激活劑主要類(lèi)型有硅土、硅藻土、二氧化硅微粒、白陶土、鞣花酸等。如為外購(gòu)，應(yīng)詳述其名稱(chēng)、供應(yīng)商名稱(chēng)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等。

不同的激活劑對(duì)肝素、狼瘡抗凝物及因子Ⅷ、Ⅸ缺乏的敏感性不同，申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品預(yù)期用途合理選擇激活劑進(jìn)行評(píng)估。

6.1.4凝血酶

凝血酶的常見(jiàn)生物學(xué)來(lái)源有重組人凝血酶、人血漿、牛血漿等。如為外購(gòu)，應(yīng)詳述其名稱(chēng)、生物學(xué)來(lái)源、供應(yīng)商名稱(chēng)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等。

6.1.5試劑盒校準(zhǔn)品、質(zhì)控品（如有）

應(yīng)包括原材料選擇、制備、賦值過(guò)程及試驗(yàn)資料。校準(zhǔn)品應(yīng)溯源至現(xiàn)行的國(guó)家或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品。質(zhì)控品一般包含正常值和異常/病理值兩個(gè)水平，申請(qǐng)人可視申報(bào)產(chǎn)品具體情況合理設(shè)置質(zhì)控品。

如包含PT/INR標(biāo)定血漿（certified plasmas），建議根據(jù)其預(yù)期用途（如：用于臨床實(shí)驗(yàn)室ISI校準(zhǔn)、繪制INR校準(zhǔn)曲線(xiàn)或INR系統(tǒng)驗(yàn)證等），參照CLSI H54文件的方法進(jìn)行原材料的選擇、制備、賦值和驗(yàn)證。

6.2主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）

6.2.1主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡(jiǎn)要說(shuō)明主要生產(chǎn)工藝的確定方法，如各組分制備的工藝、試劑的配方及關(guān)鍵工藝參數(shù)的確定等。

6.2.2主要反應(yīng)體系的研究資料，包括樣本采集及處理、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法（如有）、質(zhì)控方法等。

6.2.3不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別闡述。

（四）臨床評(píng)價(jià)資料

根據(jù)體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)的相關(guān)要求，如申請(qǐng)項(xiàng)目已列入《免于臨床試驗(yàn)體外診斷試劑目錄》，申請(qǐng)人可按照《免于臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)。

如申請(qǐng)項(xiàng)目未列入《免于臨床試驗(yàn)體外診斷試劑目錄》，或申請(qǐng)人無(wú)法按要求開(kāi)展臨床評(píng)價(jià)的，則應(yīng)按照《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求開(kāi)展臨床試驗(yàn)。下面僅對(duì)臨床試驗(yàn)中的特殊問(wèn)題進(jìn)行闡述。

1.研究方法

選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類(lèi)產(chǎn)品作為參比試劑，采用試驗(yàn)用體外診斷試劑（以下稱(chēng)考核試劑）與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。應(yīng)充分了解參比試劑的技術(shù)信息，包括適用儀器方法學(xué)（光學(xué)法、磁珠法）、臨床預(yù)期用途、主要性能指標(biāo)、校準(zhǔn)品的溯源情況（如有）、推薦的參考區(qū)間等，以便對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行科學(xué)的分析。

1.1 PT試劑盡量選擇組織凝血活酶生物學(xué)來(lái)源一致的，如同為人重組組織因子，或同為兔腦來(lái)源等。

1.2 APTT試劑應(yīng)充分考慮激活劑的類(lèi)型，如鞣花酸、硅藻土等。

2.研究對(duì)象

臨床試驗(yàn)應(yīng)選擇產(chǎn)品的預(yù)期適用人群作為研究對(duì)象，入組人群應(yīng)能夠代表產(chǎn)品適用人群的各種類(lèi)型（如：術(shù)前凝血功能檢查、常規(guī)凝血功能評(píng)估、先天及后天性凝血因子缺乏等），所有樣本均應(yīng)可以溯源。每個(gè)項(xiàng)目樣本例數(shù)應(yīng)分別滿(mǎn)足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，其中，PT、APTT、TT應(yīng)包含正常樣本及不同病理水平異常樣本，F(xiàn)IB樣本的選擇應(yīng)盡可能覆蓋其分析測(cè)量范圍并盡量均勻分布。考慮到PT、APTT試劑敏感性的差異，其入組樣本應(yīng)進(jìn)一步滿(mǎn)足如下要求：

2.1 PT/INR

PT試劑預(yù)期用于口服抗凝劑的監(jiān)測(cè)時(shí)，應(yīng)選擇至少40例接受維生素K拮抗劑（如華法林）治療的患者樣本進(jìn)行評(píng)價(jià)，其中INR2.0～4.5為30例，INR＜2.0為5例，INR＞4.5為5例，通過(guò)與已上市試劑或參考方法相比，位于治療區(qū)間（2.0～4.0）內(nèi)的85%樣本需滿(mǎn)足不超過(guò)±0.5INR單位的要求。

2.2 APTT

應(yīng)包括正常樣本、接受普通肝素治療患者樣本、含狼瘡抗凝物樣本以及凝血因子缺乏的樣本。

APTT試劑預(yù)期用于普通肝素治療的監(jiān)測(cè)時(shí)，應(yīng)通過(guò)至少20例接受普通肝素治療的患者樣本進(jìn)行評(píng)價(jià)，樣本的選擇應(yīng)能覆蓋肝素的治療范圍，并注意避免使用體外模擬添加肝素的樣本。

3.樣本類(lèi)型

用于臨床試驗(yàn)的樣本類(lèi)型應(yīng)為枸櫞酸鈉（3.2%）抗凝血漿樣本。所有樣本均應(yīng)采用新鮮樣本，并按照說(shuō)明書(shū)樣本穩(wěn)定性要求進(jìn)行離心和檢測(cè)。如無(wú)法避免使用貯存樣本時(shí)，注明貯存條件及時(shí)間，在數(shù)據(jù)分析時(shí)應(yīng)考慮其影響。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

4.1應(yīng)根據(jù)數(shù)據(jù)分布特點(diǎn)等因素選擇適用的回歸分析方法，如Deming回歸、Passing-Bablok回歸分析和最小二乘回歸估計(jì)等?；貧w分析應(yīng)重點(diǎn)觀察回歸方程（斜率和截距）、相關(guān)系數(shù)（r）或決定系數(shù)（R2）等指標(biāo)，計(jì)算斜率和截距的95%可信區(qū)間。亦可同時(shí)對(duì)相關(guān)評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)。

4.2采用Bland-Altman法，通過(guò)計(jì)算一致性限度，評(píng)價(jià)兩種測(cè)量結(jié)果的一致性，一致性限度應(yīng)在臨床認(rèn)可的界值之內(nèi)。

5.接受境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)要求

如進(jìn)口產(chǎn)品提交境外臨床試驗(yàn)資料作為臨床評(píng)價(jià)資料時(shí)，其境外臨床試驗(yàn)資料需滿(mǎn)足《接受醫(yī)療器械境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求。

（五）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)和標(biāo)簽樣稿

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)和標(biāo)簽應(yīng)滿(mǎn)足《醫(yī)療器械說(shuō)明書(shū)和標(biāo)簽管理規(guī)定》和《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》的要求。下面對(duì)凝血四項(xiàng)檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行闡述。

1.【預(yù)期用途】

至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1該產(chǎn)品用于體外定量檢測(cè)人血漿樣本中的凝血酶原時(shí)間/活化部分凝血活酶時(shí)間/凝血酶時(shí)間/纖維蛋白原。

1.2簡(jiǎn)要說(shuō)明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)證及背景情況。說(shuō)明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法。

2.【主要組成成分】

2.1說(shuō)明試劑盒包含組分的名稱(chēng)、數(shù)量、比例或濃度信息。生物活性物質(zhì)（如組織凝血活酶、磷脂、凝血酶等），應(yīng)說(shuō)明其生物學(xué)來(lái)源、活性及其他特性;說(shuō)明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。

2.2校準(zhǔn)品、質(zhì)控品（如有），應(yīng)明確具體基質(zhì)成分，此外，校準(zhǔn)品應(yīng)明確溯源性，質(zhì)控品應(yīng)注明靶值范圍，如靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨(dú)的靶值單。

2.3試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組分，應(yīng)列出相關(guān)試劑的名稱(chēng)、貨號(hào)及其他相關(guān)信息。

2.4PT試劑需注明批特異性ISI值或者提供查詢(xún)方式。

3.【儲(chǔ)存條件及有效期】

詳細(xì)介紹試劑盒的效期穩(wěn)定性、開(kāi)封/開(kāi)瓶穩(wěn)定性等信息。注明“生產(chǎn)日期、使用期限或失效日期：見(jiàn)標(biāo)簽”字樣。

4.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容

4.1樣本的類(lèi)型：明確適用的樣本類(lèi)型（靜脈血）以及所用的抗凝劑（3.2%的枸櫞酸鈉抗凝，不宜用EDTA-Na2、肝素、草酸鹽等），分離血漿宜除盡血小板（血小板計(jì)數(shù)＜10×10⁹/L）。

4.2樣本的穩(wěn)定性：明確樣本采集后和處理后的保存條件和期限等。冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否需恢復(fù)至室溫、凍融次數(shù)的要求。

4.3參考WS/T 359《血漿凝固實(shí)驗(yàn)血液標(biāo)本的采集及處理指南》或CLSI H21文件獲得更多標(biāo)本采集與處理的信息。

5.【檢驗(yàn)方法】

應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟：（以手工法/半自動(dòng)凝血分析儀為例）

5.1試驗(yàn)準(zhǔn)備：檢測(cè)試劑及樣本的復(fù)溫要求及相關(guān)注意事項(xiàng)。

5.2試劑配制方法、注意事項(xiàng)。

5.3試驗(yàn)條件：操作步驟、溫度、時(shí)間等以及試驗(yàn)過(guò)程中的注意事項(xiàng)。

5.4標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備（如適用）：詳細(xì)說(shuō)明校準(zhǔn)品的復(fù)溶方法、稀釋倍數(shù)以及標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制方法。

5.5質(zhì)量控制程序：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗(yàn)有效性的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。

5.6試驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算或讀?。盒柙敿?xì)描述對(duì)檢測(cè)結(jié)果的判定或計(jì)算方法等。

如適用于全自動(dòng)凝血分析儀，可注明“應(yīng)參照儀器使用說(shuō)明書(shū)操作”，注明校準(zhǔn)周期（如適用）及質(zhì)量控制程序。

6.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

說(shuō)明可能對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響的因素。

7.【檢驗(yàn)方法局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測(cè)方法等信息，對(duì)可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說(shuō)明，申請(qǐng)人選擇適用的條款在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中予以闡述。

7.1本產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為臨床診治的唯一依據(jù)，應(yīng)結(jié)合患者性別、年齡、病史及其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)等信息綜合考慮。當(dāng)檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析查找原因并重新確認(rèn)等。

7.2其他可能存在的問(wèn)題 。

8.【注意事項(xiàng)】建議包括以下內(nèi)容：

8.1僅用于體外診斷。

8.2標(biāo)本有可見(jiàn)的溶血時(shí)不應(yīng)采用，因?yàn)榭赡芗せ钅蜃?，干擾最終測(cè)定。

8.3使用光學(xué)原理的儀器時(shí)，需注意標(biāo)本中存在黃疸、脂血或影響光散射強(qiáng)度的干擾物質(zhì)時(shí)，可能對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響。

8.4血細(xì)胞比容值≥0.55L/L（55%）時(shí)，需調(diào)整血液與抗凝劑的比例。

8.5有關(guān)人源組分（如有）的警告，如：試劑內(nèi)質(zhì)控品或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過(guò)了HBsAg、HIV1/2-Ab、HCV-Ab和TP等項(xiàng)目的檢測(cè)，但截至目前，沒(méi)有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以確保絕對(duì)安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對(duì)待。

（六）質(zhì)量管理體系文件

主要包括綜述、生產(chǎn)制造信息、質(zhì)量管理體系程序、管理職責(zé)程序、資源管理程序、產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)程序、質(zhì)量管理體系的測(cè)量、分析和改進(jìn)程序、其他質(zhì)量體系程序信息以及質(zhì)量管理體系核查文件等。

三、參考文獻(xiàn)

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[8]尚紅,王毓三,申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第4版）[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2015.

四、編寫(xiě)單位

浙江省醫(yī)療器械審評(píng)中心。