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　　引言：新冠肺炎疫情持續(xù)暴發(fā)，在這場沒有硝煙的戰(zhàn)爭中，病毒的感染診斷成為疫情防控重中之重。而此次新型冠狀病毒能夠在全國范圍內(nèi)快速、高效的檢測，得益于我國體外診斷試劑的快速研發(fā)。

　　近年來，隨著生物技術(shù)的飛速發(fā)展，用于疾病診斷、指導(dǎo)用藥的IVD產(chǎn)品越來越多。試驗用樣本的保存、運輸及操作過程規(guī)范化的重要性日益突出，對提升體外診斷試驗樣本管理規(guī)范性，提高體外診斷試劑臨床試驗結(jié)果的可靠性至關(guān)重要。筆者結(jié)合本醫(yī)院開展的試驗項目，探討IVD臨床試驗樣本保存、運輸以及操作的特殊性。

　　IVD及其臨床試驗

　　體外診斷（IVD）試劑是在疾病的預(yù)防、診斷、治療監(jiān)測、預(yù)后觀察、健康狀態(tài)評價以及遺傳性疾病的預(yù)測過程中，用于對人體樣本（各種體液、細(xì)胞、組織樣本等）進(jìn)行體外檢測的試劑、試劑盒、校準(zhǔn)品（物）、質(zhì)控品（物）等。在我國，第二類、第三類IVD產(chǎn)品在獲得注冊進(jìn)入市場前，為驗證產(chǎn)品的安全性、有效性及與“金標(biāo)準(zhǔn)”或目前臨床廣泛評價品質(zhì)較好的已上市產(chǎn)品間的等效性，需開展臨床試驗。

　　IVD臨床試驗（包括與已上市產(chǎn)品進(jìn)行的比較研究試驗）是指在相應(yīng)的臨床環(huán)境中，對體外診斷試劑的臨床性能進(jìn)行的系統(tǒng)性研究，其目的是確認(rèn)產(chǎn)品的風(fēng)險/受益比是否可接受，并確定產(chǎn)品的適用人群及適應(yīng)證。臨床試驗的整個過程中樣本保存、運輸及操作環(huán)節(jié)對試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性起著關(guān)鍵的作用，是臨床試驗質(zhì)量保證的重要環(huán)節(jié)，決定了上市后體外診斷試劑是否安全有效，直接關(guān)系到公眾身體健康。與藥物臨床試驗相比，IVD臨床試驗涉及的生物樣本類型多樣，具有臨床試驗樣本需求量大、試驗周期短的特點。

　　臨床試驗樣本的保存

　　根據(jù)體外診斷試劑臨床試驗樣本量要求，第三類產(chǎn)品臨床試驗的總樣本數(shù)至少1000例，第二類產(chǎn)品臨床試驗的總樣本數(shù)至少200例。因此，相對于藥物或器械臨床試驗，體外診斷試劑臨床試驗需要的樣本量較大，實際上常常篩選后需保存一段時間后才會集中檢測。如果樣本需要經(jīng)過一定時間的保存時，需要記錄樣本冷凍或冷藏的起始時間、使用時間、保存期間溫度，相關(guān)人員均需簽字確認(rèn)。冷凍或冷藏樣本要在方案要求的保存時間范圍內(nèi)完成試驗，否則樣本作廢。不同的樣本會有不同的保存條件要求，除了根據(jù)臨床常規(guī)的樣本保存，還需要遵循試驗方案的規(guī)定，如樣本保存不當(dāng)有可能導(dǎo)致假陰性。如在我院開展的某基因檢測試劑盒臨床試驗，采集的尿液樣本室溫（10℃-30℃）可保存5天，未能及時檢測的樣本需在-80℃條件下保存，并避免重復(fù)凍融；用膠體金免疫層析法檢測N-末端腦鈉肽前體的檢測試劑盒，在收集血清或血漿樣本后，一周內(nèi)進(jìn)行檢測可存放在2℃-8℃，超過一周后應(yīng)放于-20℃以下，如采集的標(biāo)本為靜脈血標(biāo)本則不能冷凍；石蠟包埋組織樣本一般可在10℃-30℃條件下保存3年，而使用核酸提取試劑提取后的核酸標(biāo)本，根據(jù)不同方案的要求，DNA樣本保存于-20℃以下，RNA樣本保存于-70℃以下，一般不超過6個月，避免反復(fù)凍融，凍融次數(shù)控制在方案規(guī)定次數(shù)內(nèi)。

　　生物樣本的保存設(shè)備，如-70℃超低溫冰箱、-20℃低溫冰箱應(yīng)定期進(jìn)行維護(hù)、檢測和校準(zhǔn)，確保專人適時對試驗設(shè)施設(shè)備進(jìn)行質(zhì)量控制檢查，對儀器資料進(jìn)行歸檔管理。臨床用樣本存放的冰箱多采用節(jié)點記錄溫度的方式，可導(dǎo)出形成完整連貫的溫度曲線記錄。試驗樣本保存設(shè)備應(yīng)安裝報警系統(tǒng)，當(dāng)溫控探頭記錄的溫度超過設(shè)定的溫度范圍時，系統(tǒng)即報警提示，并自動發(fā)送報警短信通知研究者，監(jiān)測參數(shù)偏離可接受范圍時，應(yīng)及時采取應(yīng)急措施，并保存監(jiān)測和采取應(yīng)急措施的記錄。

　　相較藥物或器械臨床試驗，IVD臨床試驗的樣本種類多樣，涉及多個科室，留取病例標(biāo)本各有不同，包括各種血液、體液、病理組織等，數(shù)量繁多，各類試驗樣品留取后，保存條件也不盡相同。因此，為保證試驗樣本的正確保存，需要加強(qiáng)對試驗人員的培訓(xùn)，熟悉臨床試驗方案。主要研究者應(yīng)制定詳細(xì)的職責(zé)分工，指定專人負(fù)責(zé)樣本的保存、分發(fā)管理，其他研究者使用樣本進(jìn)行試驗時必須取得樣本管理員同意，如實填寫出入庫記錄。

　　試驗結(jié)束后，檢測剩余樣本可以根據(jù)臨床試驗中心常規(guī)流程進(jìn)行銷毀，但需要保留銷毀記錄；也可根據(jù)實際需要，統(tǒng)一保存于試驗中心，便于后期項目核查。

　　臨床試驗樣本的運輸

　　對于在研究機(jī)構(gòu)內(nèi)部進(jìn)行檢測的樣本，則直接移交給實驗室樣本管理員，移交過程應(yīng)該符合在臨床試驗方案中的要求，例如避光、室溫、2℃-8℃運輸?shù)?。樣本管理員負(fù)責(zé)核對樣本的信息和狀態(tài)，填寫樣本入庫信息。

　　樣本檢測在本機(jī)構(gòu)之外進(jìn)行時，則一般采用專業(yè)的冷鏈運輸公司將研究機(jī)構(gòu)采集到的樣品運送至檢測實驗室。由第三方冷鏈運輸單位運送的樣本應(yīng)具有實時溫度監(jiān)控，以監(jiān)測樣本在運輸過程中是否仍在要求的溫度條件下保存。冷鏈運輸后應(yīng)提供運送單，包括樣本開始運輸時間和到達(dá)檢測實驗室接收后的時間。在此時間范圍內(nèi)提取溫度監(jiān)控儀上的溫度記錄，打印保存。如果不使用第三方冷鏈運輸，則需要配備經(jīng)過國家計量部門定期檢定過的有效的溫度記錄儀對試驗樣品進(jìn)行實時溫度監(jiān)控。此外，接收樣本后還需保存運送單和溫度監(jiān)控記錄。

　　臨床試驗樣本的操作

　　不同檢測樣本的檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照操作說明書及試驗方案進(jìn)行操作。體外診斷試劑臨床試驗中因涉及到考核試劑、對比試劑、第三方復(fù)核試劑，對試驗人員專業(yè)素質(zhì)要求較為嚴(yán)格，試驗人員需熟練掌握試驗樣品的規(guī)格型號、技術(shù)要求以及操作標(biāo)準(zhǔn)。需要選擇臨床檢驗經(jīng)驗豐富、有資質(zhì)的專業(yè)人員進(jìn)行實際檢測工作，所有參與試驗的人員必須經(jīng)過培訓(xùn)，具備專業(yè)資質(zhì)及培訓(xùn)記錄證明其能勝任相關(guān)工作。

　　臨床試驗開始前，需要充分培訓(xùn)所有參與試驗的人員，使其熟悉并掌握試驗產(chǎn)品所適用的儀器、技術(shù)性能、操作方法、試驗流程等，并確保所有培訓(xùn)都有培訓(xùn)記錄。制定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，避免不同試驗人員因操作習(xí)慣不同導(dǎo)致檢測結(jié)果可能發(fā)生差異，最大限度控制試驗人為誤差。

　　臨床試驗實施過程中，如遇到疑惑或者需要重點討論解決的問題，也應(yīng)隨時進(jìn)行培訓(xùn)并記錄。如需要，試驗開始之前應(yīng)做好考核儀器系統(tǒng)的定標(biāo)和質(zhì)控，保證結(jié)果真實可控。如按照考核試劑說明書相關(guān)內(nèi)容使用定標(biāo)品進(jìn)行定標(biāo)，定標(biāo)必須通過才可進(jìn)行下一步操作；規(guī)定合適的定標(biāo)頻率和定標(biāo)間期；定標(biāo)后使用質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)控，質(zhì)控測定值必須處于規(guī)定的質(zhì)控限內(nèi)，表明質(zhì)控結(jié)果在控；研究者應(yīng)確保質(zhì)控呈現(xiàn)預(yù)期結(jié)果，方可進(jìn)行下一步操作等。

　　為了實現(xiàn)在不同研究中心和不同研究者之間檢測流程的一致性，可以在正式試驗之前使用考核試劑檢測一定數(shù)量的樣本進(jìn)行預(yù)試驗。預(yù)試驗為正式試驗的模擬，操作流程與正式試驗完全一致。預(yù)試驗可幫助試驗研究人員熟悉試驗操作流程。用于預(yù)試驗的樣本不納入全分析集。

　　《體外診斷試劑臨床試驗指導(dǎo)原則》中對新研制體外診斷試劑的臨床試驗明確要求采用試驗用體外診斷試劑與診斷該疾病的“金標(biāo)準(zhǔn)”進(jìn)行盲法同步比較。在實際操作過程中，可以根據(jù)方案要求將原始樣本重新進(jìn)行樣本編號，去除標(biāo)識化，樣本編號和原始樣本的樣本條碼號一一對應(yīng)，所有樣本的信息均可以在本中心LIS或HIS中溯源到檢驗結(jié)果。為減少因試驗人員主觀因素導(dǎo)致的結(jié)果偏差，試驗樣本管上除樣本編號及其他必要信息外，應(yīng)無其他可識別受試者身份信息的標(biāo)記，試驗過程中，實驗人員僅可看到樣本編號。樣本編號對應(yīng)的受試者信息對考核試劑試驗操作者及病理組織學(xué)檢測人員應(yīng)當(dāng)保密。

　　在實驗室檢測過程中，操作人員接觸的臨床樣本均視為可能有污染性樣本，需做好防護(hù)工作，規(guī)避生物風(fēng)險。具體要求應(yīng)在實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程中有相關(guān)規(guī)定。

　　總結(jié)

　　IVD臨床試驗中的樣本貫穿臨床試驗的始終，樣本的保存、運輸及操作的規(guī)范化直接關(guān)系試驗結(jié)果的真實性和可靠性，與產(chǎn)品最終能否報批息息相關(guān)，更直接關(guān)系到患者的健康和利益。因此，進(jìn)行體外診斷試劑臨床試驗的樣本管理，需提高研究人員樣本管理的規(guī)范化意識、法規(guī)意識，做好試驗前培訓(xùn)指導(dǎo)工作，嚴(yán)格要求，規(guī)范管理，才能保證體外診斷試劑臨床試驗結(jié)果真實可靠。
　　來源：中國食品藥品網(wǎng)