附件：醫(yī)療器械已知可瀝濾物測(cè)定方法驗(yàn)證及確認(rèn)注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2019年第78號(hào)）.doc

醫(yī)療器械已知可瀝濾物測(cè)定方法驗(yàn)證及確認(rèn)注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則
（2019年第78號(hào)）

醫(yī)療器械的可瀝濾物（Leachables）是指醫(yī)療器械或材料在臨床使用過(guò)程中釋放出的物質(zhì)的統(tǒng)稱。可瀝濾物一般包括滅菌殘留劑、工藝殘留物、降解產(chǎn)物以及材料中的單體及添加劑（包括穩(wěn)定劑、抗氧化劑、增塑劑、著色劑等）。在醫(yī)療器械產(chǎn)品與人體接觸并發(fā)揮作用的過(guò)程中，可瀝濾物也在或短期或長(zhǎng)期地對(duì)人體產(chǎn)生安全性方面的危害。

可瀝濾物安全性評(píng)價(jià)首要任務(wù)是建立擬研究物質(zhì)的允許限量（Allowable limit），其次，應(yīng)在模擬臨床最壞使用環(huán)境下測(cè)定其釋放量（Released amount），并根據(jù)其釋放量是否超過(guò)其在該產(chǎn)品該預(yù)期用途下的允許限量，形成完整的可瀝濾物安全性研究報(bào)告，其中，可瀝濾物的釋放量測(cè)定方法的設(shè)計(jì)和方法學(xué)驗(yàn)證是評(píng)價(jià)可瀝濾物安全性研究報(bào)告質(zhì)量和結(jié)果可靠性的重要依據(jù)。

本指導(dǎo)原則是對(duì)醫(yī)療器械已知可瀝濾物測(cè)定方法研究的一般要求，申請(qǐng)者應(yīng)依據(jù)具體產(chǎn)品的特性和擬研究可瀝濾物性質(zhì)對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。注冊(cè)申請(qǐng)人還應(yīng)依據(jù)具體可瀝濾物的特性和分析方法確定釋放量測(cè)定方法的設(shè)計(jì)和方法學(xué)驗(yàn)證參數(shù)的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。

本指導(dǎo)原則旨在幫助和指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)資料進(jìn)行準(zhǔn)備，以滿足技術(shù)審評(píng)的基本要求。同時(shí)有助于審評(píng)機(jī)構(gòu)對(duì)該類產(chǎn)品進(jìn)行科學(xué)規(guī)范的審評(píng)，提高審評(píng)工作的質(zhì)量和效率。

本指導(dǎo)原則是對(duì)注冊(cè)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件， 但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其它方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)的進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于醫(yī)療器械注冊(cè)申報(bào)時(shí)對(duì)已知可瀝濾物釋放量的研究和產(chǎn)品技術(shù)審評(píng)的參考。

本指導(dǎo)原則僅適用于已知可瀝濾物研究，已知可瀝濾物的信息可以通過(guò)以下途徑獲得：（1）從原材料供應(yīng)商處獲得材料的組成信息并預(yù)測(cè)潛在的可瀝濾物;（2）通過(guò)生產(chǎn)工藝文件獲得額外的加工助劑信息，例如脫模劑、粘合劑、拋光膏等;（3）通過(guò)已有醫(yī)療器械用材料的標(biāo)準(zhǔn)、文獻(xiàn)等資料查閱獲得潛在的可瀝濾物信息;（4）通過(guò)浸提試驗(yàn)（Extraction study）獲得信息，預(yù)測(cè)潛在的可瀝濾物。

值得注意的是，可瀝濾物來(lái)源可能不僅是器械原材料及工藝信息中提供的添加劑、單體、加工助劑本身，某些情況下，器械及其原材料在生產(chǎn)、制造、貯存及使用等過(guò)程中產(chǎn)生的上述化學(xué)物質(zhì)的水解、降解或反應(yīng)產(chǎn)物等宜同時(shí)納入可瀝濾物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的考慮。

本指導(dǎo)原則不適用于對(duì)未知可瀝濾物的測(cè)定研究，但部分內(nèi)容可參考使用。

二、已知可瀝濾物安全性研究的基本步驟

應(yīng)首先確認(rèn)該已知可瀝濾物是否為原材料或最終醫(yī)療器械生產(chǎn)過(guò)程中添加的添加劑，如抗氧化劑、穩(wěn)定劑等成分。如果是，應(yīng)進(jìn)一步確認(rèn)該添加劑在原材料或最終醫(yī)療器械中的添加總量是否超過(guò)該已知可瀝濾物的允許限量，如果未超過(guò)，則一般無(wú)需對(duì)該可瀝濾物本身的安全性做進(jìn)一步的研究，如果超過(guò)了允許限量，則應(yīng)模擬臨床實(shí)際使用最惡劣環(huán)境，通過(guò)浸提試驗(yàn)研究，獲得其最大釋放量，并根據(jù)其允許限量形成完整的安全性評(píng)價(jià)報(bào)告（具體可參考附錄流程圖）。

三、注冊(cè)申報(bào)資料要求

（一）相關(guān)器械描述及已知可瀝濾物信息

企業(yè)應(yīng)充分收集并提供申報(bào)器械及擬研究可瀝濾物的相關(guān)信息。產(chǎn)品信息包括產(chǎn)品物理形態(tài)（液體、凝聚、固體等）、已知可瀝濾物所在組件或材料在器械中的比例（例如按表面積或重量計(jì)算，如適用），產(chǎn)品臨床接觸方式、使用方式、累積接觸時(shí)間、預(yù)期用途等。已知可瀝濾物的基本信息包括：化學(xué)名稱、化學(xué)式及結(jié)構(gòu)式、CAS號(hào)（如有）、來(lái)源、最終醫(yī)療器械中的使用及加工方式、用途（適用時(shí)）、添加量（如適用），如可能，還應(yīng)提供可瀝濾物的理化性能，如酸堿性、密度、熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、溶解特性及相應(yīng)溶解度、極性特性等。特別需要注意的是，如通過(guò)浸提研究獲得的可瀝濾物信息，還應(yīng)提供該浸提研究的試驗(yàn)條件、步驟等資料。

（二）浸提液制備的論述

1.浸提方式選擇

可瀝濾物為臨床使用過(guò)程中從醫(yī)療器械或材料中釋放出的化學(xué)物質(zhì)。然而，由于實(shí)際臨床條件的挑戰(zhàn)，在進(jìn)行醫(yī)療器械可瀝濾物研究時(shí)，對(duì)大部分器械來(lái)說(shuō)，很難獲得臨床實(shí)際使用時(shí)的研究數(shù)據(jù)，特別是長(zhǎng)期植入類器械，因此某些情況下可通過(guò)浸提試驗(yàn)替代可瀝濾物研究，即采用浸提方式制備浸提液進(jìn)行已知可瀝濾物測(cè)定。但是務(wù)必對(duì)浸提方式進(jìn)行論述，證明浸提條件是嚴(yán)于或模擬了器械臨床最壞使用條件。因此在進(jìn)行浸提方式選擇之前，應(yīng)首先建立產(chǎn)品最壞的使用情況條件基本信息，包括接觸人群、接觸時(shí)間、接觸介質(zhì)、接觸環(huán)境、使用方式等。

常用的浸提方式包括模擬浸提、加嚴(yán)浸提、加速浸提和極限浸提（具體可參考GB/T 16886.12部分定義），一般來(lái)說(shuō)模擬浸提最接近于實(shí)際，但某些器械采用模擬浸提法可能會(huì)要求相對(duì)較大的浸提體積，這種情況下，則可能需要極大地提高對(duì)可瀝濾物測(cè)定的靈敏度以滿足安全性評(píng)價(jià)的要求。加嚴(yán)浸提（如：更長(zhǎng)時(shí)間的浸提、表面積/體積比超過(guò)臨床使用接觸量等）和極限浸提（此處及此后提到的極限浸提均指的是所用溶劑符合下面論述前提下的浸提）獲得的結(jié)果可能大于或等于患者在實(shí)際臨床使用過(guò)程中可能接受到的劑量或模擬浸提獲得的結(jié)果。如采用該方式獲得的可瀝濾物釋放量超過(guò)毒理學(xué)評(píng)估允許限量值時(shí)，可結(jié)合臨床實(shí)際使用情況進(jìn)行分析或采用模擬浸提研究，需要注意的是，在進(jìn)行模擬浸提研究時(shí)需要根據(jù)毒理學(xué)評(píng)價(jià)的要求進(jìn)行特殊的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，比如某些情況下需要確定每日最大接觸量時(shí)就需要制定24小時(shí)的取樣計(jì)劃，以獲得每日最大釋放量。但有些特殊情況下，因?qū)嶋H使用條件很難在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行模擬，則優(yōu)先推薦使用極限浸提法，比如產(chǎn)品屬于長(zhǎng)期接觸（Long-term exposure，累積接觸時(shí)間>30天）等。同時(shí)，極限浸提法或加嚴(yán)浸提排除了時(shí)間對(duì)釋放量測(cè)定的影響，不能保證所測(cè)得的可瀝濾物在與器械接觸的第一天或第一個(gè)月完全釋放給患者，但如果通過(guò)極限浸提或加嚴(yán)浸提測(cè)定出產(chǎn)品上存在的全部殘留量符合安全性評(píng)價(jià)的要求，則一般不需要再進(jìn)行模擬浸提研究，但企業(yè)需對(duì)此加嚴(yán)條件進(jìn)行論述，以確保該條件下獲得的該可瀝濾物釋放量會(huì)大于臨床使用條件下可能進(jìn)入病人體內(nèi)的量。

但在選擇加速浸提時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎，如果采用加速浸提，則應(yīng)仔細(xì)考慮加速條件對(duì)浸提動(dòng)力學(xué)及浸提物的影響。任何用于建立加速或加嚴(yán)因子的模型或概念都應(yīng)加以證明并形成文件。更多關(guān)于不同浸提方式的論述及選擇可參考ISO 10993.18標(biāo)準(zhǔn)討論。

除采用前述浸提的方式外，有時(shí)還可以采用其他方式獲得擬研究物質(zhì)。比如分析某些醫(yī)療器械產(chǎn)品上易揮發(fā)性有機(jī)物時(shí)可以采用頂空進(jìn)樣分析，這種分析方法一般更加適用于揮發(fā)性可瀝濾物，并同樣能夠達(dá)到預(yù)期的研究目的。

浸提液制備過(guò)程中，除考慮浸提方式外，還需要充分考慮樣品的選擇、浸提介質(zhì)、浸提比例、浸提時(shí)間、浸提溫度、浸提方式等。但無(wú)論選用何種浸提條件，所選浸提條件均不應(yīng)引起器械材料和目標(biāo)可瀝濾物發(fā)生化學(xué)變化。

2.樣品選擇

科學(xué)的采樣是獲得代表性樣品的關(guān)鍵，因產(chǎn)品的加工制造過(guò)程會(huì)對(duì)可瀝濾物釋放量產(chǎn)生影響，因此實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立完整的采樣操作規(guī)程，采樣方法應(yīng)經(jīng)過(guò)確認(rèn)并保留相關(guān)理由、記錄，必要時(shí)，提供相關(guān)支持性資料。

試驗(yàn)樣品優(yōu)先選擇最終產(chǎn)品或取自最終產(chǎn)品中有代表性的樣品或經(jīng)論述的與最終產(chǎn)品相同的工藝過(guò)程制得的材料。某些情況下，因產(chǎn)品大型和/或復(fù)雜的器械使得無(wú)法在終產(chǎn)品上進(jìn)行浸提時(shí)，一般可選取有代表性的部分進(jìn)行浸提，然后推導(dǎo)出整個(gè)器械的結(jié)果，代表性的部分可采用如下方法：如果含有幾種不同的材料，選取的樣品中每一組分占樣品的比例宜與該組分占被測(cè)器械的比例一致，或選擇經(jīng)評(píng)價(jià)證明是器械上殘留含量最高的一個(gè)組成部分進(jìn)行試驗(yàn)，有時(shí)還可以通過(guò)相同原材料在相同工藝條件下加工成的最終品檢測(cè)等方式進(jìn)行。

值得注意的是，某些產(chǎn)品需要在使用前現(xiàn)場(chǎng)制備，比如某些需要通過(guò)光固化、化學(xué)固化的口腔修復(fù)類產(chǎn)品等，該類產(chǎn)品的樣品應(yīng)嚴(yán)格按照產(chǎn)品使用說(shuō)明書中規(guī)定的時(shí)間、濃度、劑量等要求制備后獲得試驗(yàn)樣本。

3.浸提介質(zhì)

浸提介質(zhì)的選擇需要考慮以下因素：

（1）臨床接觸介質(zhì)性質(zhì)（酸性、堿性、極性、非極性等）。例如，對(duì)于一次性使用輸注器具擬輸注的藥物是最佳的提取溶劑，但是輸注器具和擬輸注的藥品種類繁多，且不同輸注器械在臨床的應(yīng)用情況有很大的差異，因此對(duì)于無(wú)法按照臨床使用情況制備檢驗(yàn)液的樣品，或者藥品中某些成分對(duì)已知可瀝濾物分析存在干擾時(shí)，可以使用替代溶劑開展研究。例如，對(duì)于聚氯乙烯輸注器具中增塑劑DEHP的研究，可通過(guò)充分的論證或試驗(yàn)研究分析后一般情況下可采用乙醇/水（ρ=0.9373 g/mL ~0.9378 g/mL）進(jìn)行浸提研究。

（2）已知物的基本性質(zhì)，如極性、溶解特性等，并結(jié)合臨床接觸介質(zhì)性質(zhì)，初步確定擬采用的溶劑。

（3）浸提介質(zhì)的基本性質(zhì)，如適用時(shí)，pH值、極性特征、沸點(diǎn)、可瀝濾物在該介質(zhì)下的溶解度等。例如，根據(jù)已知物的毒理學(xué)推導(dǎo)允許限量值及浸提液體積，計(jì)算得到的浸提液中的允許濃度，確認(rèn)該已知物在初步確定的替代溶劑中的溶解度能夠滿足該允許濃度的要求。

（4）替代溶劑的選擇。適用時(shí)可采用試驗(yàn)證明替代溶劑的提取能力應(yīng)高于實(shí)際臨床接觸介質(zhì)。如采用替代溶劑獲得的結(jié)果不能滿足毒理學(xué)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估要求時(shí)，可采用經(jīng)論述的更加接近臨床實(shí)際的方式進(jìn)行評(píng)估。替代溶劑的選擇應(yīng)綜合考慮上述4個(gè)因素。對(duì)于無(wú)機(jī)物（金屬元素）可選擇水或弱酸性介質(zhì)作為浸提液，這時(shí)不僅要考慮浸提過(guò)程中使用的容器，還要考慮實(shí)際使用環(huán)境，比如因酸性飲料等的使用，會(huì)使得口腔內(nèi)醫(yī)療器械常接觸較酸的液體環(huán)境，因此在進(jìn)行口腔產(chǎn)品的金屬離子釋放研究時(shí)，可采用較酸的浸提液，也可參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及指南規(guī)定。

需要說(shuō)明的是，進(jìn)行可瀝濾物分析采用的浸提介質(zhì)應(yīng)與進(jìn)行生物學(xué)試驗(yàn)的浸提介質(zhì)區(qū)分開來(lái)，因?yàn)檫m合生物試驗(yàn)的浸提介質(zhì)可能不適合進(jìn)行化學(xué)試驗(yàn)。

除此之外還應(yīng)注意，在進(jìn)行溶劑選擇時(shí)，還應(yīng)避免所用溶劑是否會(huì)與要研究的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)使得檢測(cè)不出或低于其實(shí)際的量。比如，異氰酸酯是合成聚氨酯材料的單體，但由于異氰酸酯類單體易與水發(fā)生水解反應(yīng)生成胺類物質(zhì)，因此當(dāng)對(duì)含聚氨酯材料的醫(yī)療器械產(chǎn)品中進(jìn)行異氰酸酯單體安全性研究時(shí)采用含水溶劑，如某些藥物的生理鹽水溶液、乙醇/水混合溶劑等，這種情況下獲得的結(jié)果一般是不被認(rèn)可的。相反，某些情況下，為提高檢測(cè)靈敏度或便于后續(xù)分析，可能需要對(duì)浸提液中目標(biāo)化合物進(jìn)行衍生化（如酯化），或進(jìn)行水解等，甚至在浸提過(guò)程中同時(shí)完成上述反應(yīng)，這種情況下需注意反應(yīng)效率和已反應(yīng)生成物質(zhì)等因素對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。

4.浸提體積

浸提體積的選擇首先應(yīng)保證浸提液能夠完全浸沒(méi)浸提樣品，其次浸提液中可瀝濾物濃度能夠滿足檢測(cè)靈敏度要求，同時(shí)還應(yīng)避免因其濃度過(guò)大影響被浸提物質(zhì)的進(jìn)一步析出。如果供試品溶液中待測(cè)成分濃度超過(guò)線性范圍，一般需通過(guò)稀釋的方法降低待測(cè)成分濃度后再行測(cè)定。

5.浸提溫度

對(duì)于浸提溫度，首先應(yīng)考慮器械臨床實(shí)際的使用溫度，如選擇提高溫度進(jìn)行加速浸提、加嚴(yán)浸提或極限浸提時(shí)應(yīng)注意，浸提溫度不應(yīng)引起器械材料和目標(biāo)可瀝濾物發(fā)生化學(xué)變化。

6.浸提時(shí)間

對(duì)于浸提時(shí)間，應(yīng)按照器械作用于患者的性質(zhì)和接觸時(shí)間來(lái)確定并盡可能模擬產(chǎn)品臨床實(shí)際，適用時(shí)，宜特別考慮臨床最大可能接觸時(shí)間。

7.其他因素

除上述條件外，還應(yīng)考慮是否需要采用動(dòng)態(tài)模擬、浸提液的循環(huán)速度等因素，無(wú)論采取何種浸提條件，均需證明器械所選用的浸提條件嚴(yán)于或等于產(chǎn)品在預(yù)期使用中帶給患者的最大風(fēng)險(xiǎn)下的條件。

（三）分析測(cè)試方法

對(duì)于某些已經(jīng)建立起標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法的研究物質(zhì)，優(yōu)先選用標(biāo)準(zhǔn)方法，如國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)等，或由知名技術(shù)組織或有關(guān)科技文獻(xiàn)或期刊中公布的方法，在使用有關(guān)科技文獻(xiàn)或期刊中公布的方法之前，應(yīng)參照本指南中方法學(xué)驗(yàn)證參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證，以確保方法的適用性。如果不能確定方法的適用性，應(yīng)開發(fā)合適的新方法。

對(duì)于無(wú)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法的可瀝濾物，企業(yè)需開發(fā)新的檢測(cè)方法并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證及確認(rèn)工作。開發(fā)新的可瀝濾物檢測(cè)方法應(yīng)根據(jù)擬研究物質(zhì)的理化性質(zhì)（包括極性、穩(wěn)定性、溶解特性、環(huán)境敏感性等）、浸提選用溶劑或毒理學(xué)評(píng)估所需的精度等合理選擇檢測(cè)儀器及檢測(cè)方法，同時(shí)，應(yīng)進(jìn)行必要的方法學(xué)驗(yàn)證以保證方法的可靠且能滿足安全性評(píng)價(jià)要求。值得注意的是，在進(jìn)行方法驗(yàn)證之前，宜考慮分析方法的系統(tǒng)適應(yīng)性，如采用色譜法時(shí)，通?？紤]的因素包括分離度、靈敏度、拖尾因子、重復(fù)性等。

對(duì)于無(wú)機(jī)物（元素）檢測(cè)方法有：電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法（ICP-OES），電感耦合等離子體-質(zhì)譜法（ICP-MS），原子吸收分光光度法（AAS）、離子色譜（IC）等。

對(duì)于有機(jī)物的主要檢測(cè)方法有：高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法（HPLC-DAD）、高效液相色譜-熒光檢測(cè)法（HPLC-FLD）、高效液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS）、離子色譜法（IC）、氣相色譜-氫火焰離子化檢測(cè)法（GC-FID）、氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）和傅里葉變換紅外光譜法（FTIR）等。

對(duì)于浸提液中可瀝濾物含量較低的微量或痕量分析，如分析方法足夠靈敏，可采用浸提液直接進(jìn)行分析測(cè)定，無(wú)需富集處理;如直接測(cè)定提取液或模擬提取液，分析方法的靈敏度達(dá)不到檢測(cè)要求時(shí)，常用的檢測(cè)樣本處理方法有：（1）氮吹濃縮（一般適用于有機(jī)溶劑），需要注意的是氮吹的氣流速度和溫度;（2）減壓濃縮富集：采用減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮的方法制備檢測(cè)樣本，但需注意防止溫度過(guò)高影響樣本中待測(cè)物的穩(wěn)定性，避免樣本在富集處理過(guò)程中待測(cè)物進(jìn)一步降解的情況發(fā)生，同時(shí)需考慮待測(cè)物的揮發(fā)性對(duì)測(cè)定準(zhǔn)確性的影響;（3）液相/固相萃取：對(duì)提取液或模擬提取液進(jìn)行液相/固相萃取;但需注意液相萃取溶劑和固相填料及洗脫溶劑的選擇，建議采用加內(nèi)標(biāo)的方法，確保待測(cè)物的有效富集。（4）衍生化：為提高待測(cè)物的可測(cè)性，可選擇適宜的衍生化試劑對(duì)待測(cè)物進(jìn)行衍生化處理。

如果采用新開發(fā)方法進(jìn)行測(cè)定，需要按照以下項(xiàng)目（參見第四部分方法學(xué)驗(yàn)證資料）開展方法學(xué)驗(yàn)證，如果修改采用現(xiàn)有文獻(xiàn)方法，則需要根據(jù)修改內(nèi)容，參照選擇“（四）方法學(xué)驗(yàn)證資料”中的項(xiàng)目進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，并給與說(shuō)明。

研究報(bào)告中除包含所采用的詳細(xì)的測(cè)試方法和步驟外，還應(yīng)明確使用的儀器信息及儀器設(shè)置參數(shù)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或?qū)φ掌沸畔ⅰ?/p>

（四）方法學(xué)驗(yàn)證資料

定量分析應(yīng)進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，驗(yàn)證的目的是證明采用的方法滿足于檢測(cè)的基本要求，藥典（如中國(guó)藥典、美國(guó)藥典等）和人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）指南中均給出了特定定量分析要驗(yàn)證的內(nèi)容，一般包括方法的準(zhǔn)確度、精密度、專屬性、線性、靈敏度（檢測(cè)限和定量限）等。

需要說(shuō)明的是，在方法開發(fā)和驗(yàn)證過(guò)程中，需要考慮基質(zhì)效應(yīng)的影響，基質(zhì)效應(yīng)指的是在對(duì)分析物的濃度或質(zhì)量測(cè)定過(guò)程中，來(lái)自樣品中其他化合物的一種或幾種綜合的影響。需驗(yàn)證在采用開發(fā)的方法測(cè)定可瀝濾物含量時(shí)，不會(huì)因其他成分的存在而對(duì)擬研究物質(zhì)造成干擾。

1.專屬性

專屬性是指在一些可能存在的組分，如其它可瀝濾物、降解物、基質(zhì)等存在時(shí)，對(duì)被分析物準(zhǔn)確可靠測(cè)定的能力，是評(píng)價(jià)方法能否正確鑒定并檢測(cè)出被測(cè)物的一種方法。宜采用適宜的方法對(duì)專屬性進(jìn)行驗(yàn)證并排除各種稀釋劑、基質(zhì)、降解產(chǎn)物、其他雜質(zhì)等的干擾，如色譜方法中，可采用典型的色譜圖來(lái)證明專屬性。

2.線性

線性是指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)定響應(yīng)值與樣品中被測(cè)物濃度（量）成比例關(guān)系的程度，是定量測(cè)量的基礎(chǔ)。線性關(guān)系應(yīng)以信號(hào)對(duì)被分析物的濃度或含量做圖，根據(jù)圖形是否線性進(jìn)行評(píng)價(jià)。如果有線性關(guān)系，可用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法估算試驗(yàn)結(jié)果，如最小二乘法。必要時(shí)，響應(yīng)信號(hào)可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計(jì)算，或者采用描述濃度或含量-響應(yīng)關(guān)系的非線性模型，并說(shuō)明依據(jù)。

為建立線性，可用標(biāo)準(zhǔn)品或同一對(duì)照品貯備液經(jīng)精確稀釋，或分別精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌?，制備一系列?biāo)準(zhǔn)溶液的方法進(jìn)行測(cè)定，建議至少制備5個(gè)不同濃度的對(duì)照品溶液，同時(shí)應(yīng)給出回歸方程和相關(guān)系數(shù)（一般不小于0.99，在復(fù)雜基質(zhì)或痕量分析時(shí)，接受范圍可適當(dāng)放寬），若用其他方法則應(yīng)證明其合理性。

需要說(shuō)明的是，建立方法過(guò)程中并不是線性范圍越寬越好，實(shí)際上過(guò)寬的線性范圍會(huì)讓操作時(shí)不方便，且增加了測(cè)量誤差的可能，可根據(jù)目標(biāo)物濃度確定合適的工作曲線范圍。

3.范圍

范圍是指分析方法能達(dá)到一定的精密度、準(zhǔn)確度和線性要求時(shí)的高低濃度或量的區(qū)間。特定的范圍一般是從線性研究中得到的，它依賴于分析方法應(yīng)用目的。選擇的方法應(yīng)保證實(shí)際樣本中待測(cè)可瀝濾物濃度在其線性范圍內(nèi)，當(dāng)器械中可瀝濾物大于定量限時(shí)，還應(yīng)結(jié)合浸提液制備時(shí)的浸提比例、是否進(jìn)行富集等因素，確認(rèn)由毒理學(xué)評(píng)估數(shù)值轉(zhuǎn)化的溶液濃度是否在所設(shè)定的線性范圍內(nèi)。尤其是當(dāng)器械適用于不同的人群，如兒童、嬰兒甚至早產(chǎn)兒等人群，其線性最低點(diǎn)設(shè)置更應(yīng)關(guān)注是否能夠滿足該類人群的毒理學(xué)評(píng)估結(jié)果的要求。如果供試品溶液中待測(cè)成分濃度超過(guò)線性范圍，一般需通過(guò)稀釋的方法降低待測(cè)成分濃度后測(cè)定。

4.檢測(cè)限（LOD）

檢測(cè)限是指樣品中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量，方法的檢測(cè)限必須滿足待測(cè)物的毒理學(xué)評(píng)估數(shù)值要求，即可瀝濾物的限度濃度應(yīng)大于檢測(cè)限。應(yīng)采用適宜的方法考察檢測(cè)限，常用的評(píng)估方法有以下兩種，除了下面所列的方法外其他經(jīng)驗(yàn)證的方法也可被接受。

（1）信噪比法

該方法僅適用于能顯示基線噪音的分析方法。信噪比的測(cè)定是通過(guò)比較含已知低濃度被分析物的樣品與空白樣品的測(cè)試信號(hào)，計(jì)算被分析物可被確切地檢測(cè)的最小濃度，當(dāng)信噪比在3:1或2:1時(shí)的檢測(cè)限度通常被接受。

（2）基于響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法

檢測(cè)限（LOD）表示為：LOD=3.3δ/S

δ：響應(yīng)值的偏差

S：標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率

斜率S可從被分析物的標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)估算，δ的值可由多種途徑估算。如通過(guò)對(duì)空白樣品多次分析，然后計(jì)算其響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。

5.定量限（LOQ）

定量限是指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)符合準(zhǔn)確度和精密度的要求。常用的評(píng)估方法有以下兩種，除了下面所列的方法外其他經(jīng)驗(yàn)證的方法也可被接受。

（1）信噪比法

該方法儀適用于能顯示基線噪音的分析方法。信噪比的測(cè)定是通過(guò)比較含有已知低濃度被分析物的樣品與空白樣品的測(cè)定信號(hào)，來(lái)計(jì)算被測(cè)物能夠準(zhǔn)確定量的最小濃度，典型信噪比為10:1。

（2）基于響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法

定量限（LOQ）表示為：LOQ=10δ/S

δ：響應(yīng)值的偏差

S：標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率

斜率S可從被分析物的標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)估算，δ的值可由多種途徑估算。如通過(guò)對(duì)空白樣品多次分析，然后計(jì)算其響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。

通常情況下，只有當(dāng)目標(biāo)分析物的含量在接近于“零”的時(shí)候才需要確定方法的檢測(cè)限或定量限。當(dāng)分析物濃度遠(yuǎn)大于LOQ時(shí)，沒(méi)有必要評(píng)估方法的LOD和LOQ。但是對(duì)于那些濃度接近于LOD與LOQ的痕量和超痕量檢測(cè)，并且報(bào)告為“未檢出”時(shí)，或需要利用LOD與LOQ進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估或法規(guī)決策時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確定LOD與LOQ。

6.精密度

精密度是指在規(guī)定的條件下，同一份均勻供試品檢驗(yàn)液，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，考察方法一般可進(jìn)行重復(fù)性研究。重復(fù)性指由同一個(gè)分析人員在盡可能相同的條件下對(duì)配制的不同份相同濃度供試品溶液進(jìn)行測(cè)試。一般地，供試品檢驗(yàn)液應(yīng)立即檢測(cè)，若不能，則應(yīng)驗(yàn)證貯存條件下浸提液的穩(wěn)定性和均一性。

關(guān)于可瀝濾物測(cè)定一般應(yīng)采用重復(fù)性對(duì)精密度進(jìn)行考察，評(píng)價(jià)方法如下：

在方法的規(guī)定線性范圍內(nèi)至少測(cè)定9次，如分別采用標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)高、中、低3種濃度的供試品溶液重復(fù)測(cè)定3次。

不同含量的可瀝濾物精密度考察可接受范圍可參照表1進(jìn)行考察，在復(fù)雜基質(zhì)或更低濃度分析時(shí)，接受范圍可適當(dāng)放寬。

表1 精密度考察可接受范圍

7.準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確度是指采用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，通常用回收率評(píng)價(jià)。驗(yàn)證時(shí)一般要求對(duì)不同濃度樣品進(jìn)行平行測(cè)定，計(jì)算平均回收率，用于回收率試驗(yàn)的樣品以不含待測(cè)成分的空白樣品為最好?？梢圆捎眉訕?biāo)回收率試驗(yàn)，按樣品的處理步驟分析，得到的結(jié)果與理論值的比值。若采用加標(biāo)回收率試驗(yàn)，加標(biāo)樣品的濃度應(yīng)覆蓋線性范圍的高、中、低濃度，并分別計(jì)算平均回收率。除平均回收率外，還應(yīng)考察不同測(cè)試樣本數(shù)據(jù)的離散程度，一般用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）表示。一般來(lái)說(shuō)，不同的分析水平的可接受的回收率及RSD范圍也不同。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)方法回收率偏差范圍評(píng)價(jià)可參見表2，在復(fù)雜基質(zhì)或更低濃度分析時(shí)，接受范圍可適當(dāng)放寬。

表2 方法回收率偏差范圍

（五）方法轉(zhuǎn)移及確認(rèn)

方法轉(zhuǎn)移指的是建立合適的分析方法并對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證后，新的實(shí)驗(yàn)室采用該方法進(jìn)行檢驗(yàn)前還應(yīng)進(jìn)行方法比對(duì)性測(cè)試，比對(duì)性測(cè)試需要考慮的因素包括樣品數(shù)量、濃度級(jí)別、重復(fù)次數(shù)等。方法確認(rèn)是證明經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的方法適用于本次檢驗(yàn)的過(guò)程及被測(cè)樣品，同時(shí)還應(yīng)證明方法使用人員有能力正確地操作國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布的方法或者已建立并驗(yàn)證過(guò)的方法。確認(rèn)內(nèi)容可根據(jù)方法本身的特點(diǎn)和檢驗(yàn)人員對(duì)方法操作的熟練程度由檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室自己確定。美國(guó)藥典（USP）在其附錄〈1226〉“藥典分析方法確認(rèn)（verification of compendial methods）”中對(duì)分析方法確認(rèn)需要確認(rèn)內(nèi)容給出了指導(dǎo)意見，此處不再贅述。

（六）方法再驗(yàn)證

在某些情況下，如原材料的合成工藝改變、分析方法發(fā)生改變等，企業(yè)應(yīng)進(jìn)行充分的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，并根據(jù)評(píng)估結(jié)果考慮是否需要對(duì)分析方法再次進(jìn)行全面的或部分的驗(yàn)證，以確保分析方法可行。

當(dāng)原材料的合成工藝或來(lái)源發(fā)生改變時(shí)，可能引入新的物質(zhì)，則原可瀝濾物的檢測(cè)方法的專屬性和/或準(zhǔn)確度就需要重新進(jìn)行驗(yàn)證，以證明新引入的物質(zhì)對(duì)原有可瀝濾物的含量測(cè)定無(wú)干擾。

當(dāng)某一項(xiàng)目的分析方法發(fā)生改變時(shí)，如采用高效液相色譜法測(cè)定含量的檢測(cè)波長(zhǎng)發(fā)生改變，則要重新進(jìn)行檢測(cè)限、專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性等內(nèi)容的驗(yàn)證，同時(shí)還應(yīng)進(jìn)行方法改變前后所得結(jié)果的對(duì)比研究，證明變更后方法的合理、可行。

（七）數(shù)據(jù)要求

前述所有取樣、儀器使用、標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌沸畔ⅰ⑸V柱、儀器的校準(zhǔn)等均應(yīng)被記錄，且應(yīng)通過(guò)各種方式確保其真實(shí)、準(zhǔn)確、完整、可追溯，以確保能夠完整重現(xiàn)數(shù)據(jù)產(chǎn)生的步驟和順序，防止漏記和隨意涂改、偽造或編造數(shù)據(jù)。

（八）報(bào)告內(nèi)容

應(yīng)包括測(cè)定試驗(yàn)論述、試驗(yàn)方案、試驗(yàn)報(bào)告。其中，試驗(yàn)論述應(yīng)說(shuō)明產(chǎn)品基本信息（材料組成、人體接觸途徑及接觸時(shí)間等）及可瀝濾物基本信息，樣品制備及浸提條件描述及其選擇依據(jù)，測(cè)定方法來(lái)源及適用性論述或測(cè)定方法驗(yàn)證及確認(rèn)報(bào)告。試驗(yàn)方案應(yīng)包括：樣品制備、浸提條件及測(cè)試方法、數(shù)據(jù)分析方案。試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)報(bào)告詳細(xì)的測(cè)試方法（包括設(shè)備及試劑來(lái)源、樣品制備步驟，必要時(shí)附圖）、測(cè)試結(jié)果、數(shù)據(jù)處理、結(jié)論及典型性圖譜等。

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11.ISO/IEC 17025-2017，General requirements for the competence of testing and calibration laboratories[S].

五、起草單位

本指導(dǎo)原則由國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心編寫并負(fù)責(zé)解釋。

附錄

醫(yī)療器械已知可瀝濾物測(cè)定的一般流程

注：

可瀝濾物來(lái)源可能不僅是器械原材料及工藝信息中提供的添加劑、單體、加工助劑本身，某些情況下，器械及其原材料在生產(chǎn)、制造、貯存及使用等過(guò)程中產(chǎn)生的上述化學(xué)物質(zhì)的水解、降解或反應(yīng)產(chǎn)物等宜同時(shí)納入可瀝濾物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的考慮。