附件：抗核抗體檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2020年第14號）.doc

抗核抗體檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對抗核抗體（Antinuclear antibody，ANA）檢測試劑注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評部門審評注冊申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對抗核抗體檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

抗核抗體作為自身免疫病（autoimmune diseases，AID）重要的生物學(xué)標(biāo)志，是臨床應(yīng)用中最廣泛、最基礎(chǔ)的一組自身抗體。臨床常見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic Lupus Erythematosus，SLE）、干燥綜合征、系統(tǒng)性硬化病、混合結(jié)締組織病及多發(fā)性肌炎/皮肌炎等系統(tǒng)性（非器官特異性）AID患者。同時(shí)，ANA可見于器官特異性AID患者，如自身免疫性肝病、自身免疫性甲狀腺炎等。除此之外，ANA也可見于慢性感染性疾病及健康人群中。

細(xì)胞核是ANA靶抗原所在的最重要的結(jié)構(gòu)部位，因此傳統(tǒng)意義上的ANA是指抗細(xì)胞核抗原成分的自身抗體總稱。隨著檢測技術(shù)的改進(jìn)，尤其是培養(yǎng)細(xì)胞抗原基質(zhì)（如HEp-2細(xì)胞）的廣泛應(yīng)用，ANA的定義擴(kuò)展到以真核細(xì)胞各種成分（包括細(xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架蛋白及細(xì)胞分裂周期蛋白等）為靶抗原的自身抗體的總稱。

目前，ANA檢測分成ANA總抗體的檢測和針對靶抗原的特異性自身抗體檢測。其中，ANA總抗體的檢測方法主要包括間接免疫熒光法（indirect immunofluorescence，IIF）、酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）等。ANA特異性自身抗體檢測方法主要包括ELISA法、線性免疫印跡法（line immunoassay，LIA）、化學(xué)發(fā)光免疫分析法（chemiluminescence immunoassay，CLIA）等。

本指導(dǎo)原則所述抗核抗體檢測試劑是指利用間接免疫熒光法、酶聯(lián)免疫吸附法、化學(xué)發(fā)光法、線性免疫印跡法等基于抗原抗體反應(yīng)原理，針對人血清、血漿樣本中總抗核抗體或針對靶抗原的特異性自身抗體進(jìn)行體外定性和/或半定量和/或定量檢測的試劑。同時(shí)，本指導(dǎo)原則是針對抗核抗體檢測試劑的通用指導(dǎo)原則，申請人應(yīng)結(jié)合具體產(chǎn)品的特點(diǎn)進(jìn)行申報(bào)。如果申報(bào)產(chǎn)品有具體指導(dǎo)原則，應(yīng)參照執(zhí)行。

本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行注冊申請和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）（以下簡稱《辦法》）、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），抗核抗體及針對靶抗原的特異性自身抗體檢測試劑屬于自身抗體檢測試劑，管理類別為Ⅱ類6840。

二、注冊申報(bào)資料要求

注冊申報(bào)資料的撰寫應(yīng)符合《辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）（以下簡稱44號公告）的相關(guān)要求。

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、臨床適應(yīng)癥背景情況、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價(jià)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。其中，需注意以下內(nèi)容：

1.臨床適應(yīng)癥背景情況

應(yīng)對申報(bào)的每一個(gè)抗核抗體具體項(xiàng)目進(jìn)行詳細(xì)的描述，分別闡述每個(gè)靶抗原特異性自身抗體的具體特點(diǎn)及相應(yīng)臨床適應(yīng)癥信息，包括適應(yīng)癥的發(fā)生率、適用人群等。說明具體的臨床意義，例如：是否用于輔助診斷、鑒別診斷、分型及疾病活動(dòng)性監(jiān)測等。介紹相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法。

2.同類產(chǎn)品上市情況

應(yīng)著重從技術(shù)方法、主要原材料、檢測限、陽性判斷值或參考區(qū)間等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

3.關(guān)于抗DNA抗體的幾點(diǎn)考慮

3.1如產(chǎn)品聲稱用于高親和力抗ds-DNA抗體檢測，應(yīng)描述如何證明產(chǎn)品僅針對高親和力抗體進(jìn)行檢測。

3.2如產(chǎn)品包括對抗單鏈DNA（ss-DNA）抗體的檢測，并同時(shí)聲稱具備檢測抗ds-DNA抗體的能力，應(yīng)說明檢測結(jié)果需結(jié)合抗ds-DNA抗體檢測結(jié)果進(jìn)行解釋，并對解釋時(shí)的難點(diǎn)進(jìn)行分析。

（二）主要原材料的研究資料（如需提供）

若主要原材料為申請人自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須穩(wěn)定；如主要原材料源于外購，應(yīng)提供的資料包括：供應(yīng)商提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告以及申請人對到貨后主要原材料的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。

1.抗原

應(yīng)詳述抗原的名稱及生物學(xué)來源，如為外購抗原，則應(yīng)提供外購方名稱，外購方出具的抗原性能指標(biāo)及檢驗(yàn)證書，詳述申請人對該抗原技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請人確定該抗原作為主要原材料的依據(jù)。如為企業(yè)自制抗原，對于天然抗原，則應(yīng)提供抗原提取及純化、鑒定等實(shí)驗(yàn)過程予以詳述；對于重組抗原，則應(yīng)提交有關(guān)特定基因選擇、基因序列、質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、抗原表達(dá)及抗原純化、鑒定等詳細(xì)內(nèi)容。

2.其他主要原輔料

應(yīng)提交各種原輔料的選擇及驗(yàn)證資料，如二抗、工具酶、固相載體、化學(xué)發(fā)光劑、反應(yīng)緩沖液等，如為外購，應(yīng)詳述每一原輔料的外購方名稱，提交外購方出具的每一原輔料性能指標(biāo)及檢驗(yàn)證書，詳述申請人對每一原輔料技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請人確定該原輔料作為主要原輔料的依據(jù)。

3.校準(zhǔn)品、質(zhì)控品（如有）

應(yīng)包括原料選擇、制備、定值過程及試驗(yàn)資料。校準(zhǔn)品應(yīng)溯源至現(xiàn)行的國家或國際參考品（如有）。質(zhì)控品應(yīng)至少包含陰性和陽性兩個(gè)水平。陽性質(zhì)控品可選擇臨床陽性樣本，陰性質(zhì)控品可選擇臨床陰性樣本或緩沖溶液等。

4.企業(yè)內(nèi)部參考品

如申報(bào)產(chǎn)品有相應(yīng)的國家參考品，則企業(yè)內(nèi)部參考品應(yīng)參考國家參考品的項(xiàng)目設(shè)置，且不低于國家參考品要求。若無國家參考品，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗(yàn)證的實(shí)際情況自行設(shè)定企業(yè)內(nèi)部參考品。

應(yīng)提交企業(yè)內(nèi)部參考品的原料選擇、制備、陰陽性及濃度/滴度確認(rèn)等相關(guān)驗(yàn)證資料。說明參考品陰陽性及濃度/滴度確認(rèn)的方法或試劑（建議采用國內(nèi)已上市的、臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類試劑）。濃度確認(rèn)應(yīng)采用國家或國際標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行溯源（如有）。企業(yè)內(nèi)部參考品的基質(zhì)應(yīng)與待測樣本相同。針對多項(xiàng)目聯(lián)合檢測試劑，應(yīng)分別對每一個(gè)靶抗原特異性自身抗體項(xiàng)目進(jìn)行研究。

對于IIF-ANA檢測試劑，企業(yè)內(nèi)部參考品至少應(yīng)包括：陰性參考品、陽性參考品和精密度參考品。其中，陽性參考品應(yīng)充分考慮可報(bào)告熒光模型的驗(yàn)證（至少包括均質(zhì)型、胞漿顆粒型、分裂期細(xì)胞著絲點(diǎn)型等三種熒光模型），可選擇多份確認(rèn)為陽性的臨床樣本，并設(shè)置不同滴度水平。陰性參考品應(yīng)考慮檢測特異性的評價(jià)，適當(dāng)納入其他AID特異性自身抗體陽性樣本。精密度參考品應(yīng)至少設(shè)置一個(gè)弱陽性水平參考品。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）

生產(chǎn)工藝主要包括：各組分制備工藝的研究，包括試劑的配方及工藝關(guān)鍵參數(shù)的確定依據(jù)等。反應(yīng)體系主要包括樣本采集及處理、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件等確定的依據(jù)，以及校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法。

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.主要生產(chǎn)工藝過程的研究資料，每一步生產(chǎn)工藝的確認(rèn)資料及試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

3.主要反應(yīng)體系的研究資料、每一步反應(yīng)體系的確認(rèn)資料及試驗(yàn)數(shù)據(jù)，包括樣本采集及處理、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法（如有）、質(zhì)控方法等。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)提交在產(chǎn)品研制或成品驗(yàn)證階段對試劑盒所有的分析性能進(jìn)行研究的資料，對于每項(xiàng)分析性能的研究都應(yīng)包括研究目的、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)研究背景信息也應(yīng)在資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號和臨床樣本來源等。分析性能評估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)國內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。

1.檢測限

申請人可根據(jù)實(shí)際情況選擇合理方法研究擬申報(bào)試劑的檢測限。

1.1定性/半定量檢測試劑

對檢測限國家參考品或生產(chǎn)企業(yè)提供的參考品進(jìn)行檢測，濃度高于檢測限參考品應(yīng)檢出陽性，濃度低于檢測限參考品應(yīng)檢出陰性，檢測限參考品可檢出陰性或陽性。

1.2定量檢測試劑

建議參照國內(nèi)相關(guān)性能評估文件或EP17-A2文件推薦的定義和設(shè)計(jì)方案，對申報(bào)產(chǎn)品的空白限（LoB）、檢出限（LoD）以及定量限（LoQ）進(jìn)行合理評估和驗(yàn)證。

2.精密度

針對本類產(chǎn)品的精密度評價(jià)主要包括以下要求：

2.1對于半定量/定量檢測試劑，在可報(bào)告濃度范圍內(nèi)，至少應(yīng)在接近醫(yī)學(xué)決定水平（cut-off值）濃度點(diǎn)以及陽性水平濃度點(diǎn)進(jìn)行精密度的評價(jià)。對于定性檢測試劑，至少應(yīng)選擇接近c(diǎn)ut-off值的樣本進(jìn)行精密度的評價(jià)。

2.2合理的精密度評價(jià)周期，例如：為期至少20天的連續(xù)檢測，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測，從而對批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評價(jià)。

2.3對于采用新技術(shù)進(jìn)行的試驗(yàn)，或需要對檢測結(jié)果進(jìn)行主觀解釋時(shí)，申請人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對室間精密度進(jìn)行評價(jià)。

3.線性范圍

對于定量或半定量檢測的試劑，建議通過檢測已知自身抗體濃度的樣本來描述產(chǎn)品測試的線性范圍。在產(chǎn)品的設(shè)計(jì)研究描述中，建議包含樣本類型、準(zhǔn)備方法、樣本濃度、測試重復(fù)數(shù)以及采用的統(tǒng)計(jì)方法。同時(shí)聲明可接受標(biāo)準(zhǔn)，并通過數(shù)據(jù)來證實(shí)研究結(jié)果滿足預(yù)期要求。研究結(jié)果應(yīng)包含線性回歸斜率和截距的95%置信區(qū)間，以及整個(gè)線性范圍內(nèi)的偏差。同時(shí)建議研究結(jié)果中包含不同水平的期望值和觀測值。

4.準(zhǔn)確度

對于定量檢測的試劑，申請人可根據(jù)實(shí)際情況合理選擇一種或多種方法對試劑進(jìn)行準(zhǔn)確度研究，如：與國家/國際參考品的相對偏差、方法學(xué)比對或回收試驗(yàn)等方法。

5.陽性/陰性參考品符合率

對于定性或半定量檢測的試劑，如申報(bào)產(chǎn)品有相應(yīng)的國家參考品，則企業(yè)內(nèi)部陽性/陰性參考品應(yīng)參考國家參考品的項(xiàng)目設(shè)置。在不低于國家參考品要求的前提下，申請人可以結(jié)合實(shí)際情況設(shè)置合理的內(nèi)部陽性/陰性參考品。對于沒有國家參考品的產(chǎn)品，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗(yàn)證的實(shí)際情況自行設(shè)定企業(yè)內(nèi)部參考品，陽性參考品應(yīng)著重考慮抗體滴度要求，陰性參考品則主要涉及對分析特異性（交叉反應(yīng)）的驗(yàn)證情況。

申請人應(yīng)提供企業(yè)內(nèi)部陽性/陰性參考品的來源、抗體滴度等信息，并提交詳細(xì)的驗(yàn)證資料。

6.特異性

6.1交叉反應(yīng)

建議通過檢測來自其它自身免疫性疾病患者的臨床樣本，來評價(jià)試驗(yàn)的特異性，并在提交的申報(bào)資料中詳述產(chǎn)品的研究設(shè)計(jì)和評價(jià)結(jié)果。

6.2干擾物質(zhì)

6.2.1內(nèi)源性干擾

對樣本中常見的內(nèi)源性干擾物質(zhì)進(jìn)行檢測，如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素、類風(fēng)濕因子（RF）、干擾抗體（如人抗鼠抗體，human anti-mouse antibodies，HAMA）等。建議對抗核抗體陰性、弱陽性（臨界濃度）的臨床樣本或模擬添加樣本分別進(jìn)行驗(yàn)證，以確定可接受干擾物質(zhì)的濃度。

6.2.2抗凝劑的干擾（如有）

如果試劑盒適用樣本類型包括血漿樣本，應(yīng)采用各種適用抗凝劑抗凝的血漿樣本分別與血清樣本進(jìn)行對比實(shí)驗(yàn)研究。

7.鉤狀（Hook）效應(yīng)

需采用高濃度自身抗體陽性血清進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開始檢測，每個(gè)梯度的稀釋液重復(fù)3～5次，對鉤狀效應(yīng)進(jìn)行合理的驗(yàn)證。應(yīng)給出不會(huì)產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)的抗體濃度，并在產(chǎn)品說明書上寫明對鉤狀效應(yīng)的研究結(jié)果。

8.溯源性

對于企業(yè)內(nèi)部參考品、校準(zhǔn)品均應(yīng)提供詳細(xì)的溯源資料，包括溯源方法、溯源過程，溯源過程中每一步的不確定度的計(jì)算等內(nèi)容。

（五）陽性判斷值確定資料

應(yīng)詳細(xì)說明產(chǎn)品陽性判斷值（cut-off值）確定的基本原理。包括確定正常人群的數(shù)量與患病人群的數(shù)量所采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。如果可能，建議能夠提供評價(jià)人群的年齡、性別和統(tǒng)計(jì)學(xué)信息。應(yīng)證明采用的cut-off值能夠有效區(qū)分陰、陽性樣本。如果檢測結(jié)果存在可疑區(qū)間，應(yīng)該定義可疑結(jié)果的基礎(chǔ)，并指出可疑結(jié)果如何處理，例如，對可疑結(jié)果的樣本是否需要進(jìn)行重復(fù)測試。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、加速破壞穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性及開封/開瓶穩(wěn)定性（如涉及）等研究，申請人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

樣本穩(wěn)定性研究主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫度范圍），每間隔一定的時(shí)間段即對儲(chǔ)存樣本進(jìn)行擬檢測項(xiàng)目的分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行評價(jià)。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果分別應(yīng)在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】兩項(xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（七）臨床評價(jià)資料

根據(jù)《關(guān)于公布新修訂免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)醫(yī)療器械目錄的通告》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2018年第94號），抗核抗體檢測試劑可免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)，申請人可依照《免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評價(jià)資料基本要求（試行）》開展評價(jià)。申請人如無法或不適于按照上述要求對產(chǎn)品進(jìn)行臨床評價(jià)，則應(yīng)按照《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求開展臨床試驗(yàn)。

下面僅對臨床試驗(yàn)中的基本問題進(jìn)行闡述。

1.研究方法

建議將試驗(yàn)用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）檢測結(jié)果與具有相同臨床適應(yīng)癥的已獲批上市產(chǎn)品進(jìn)行比對。如有條件，建議與公認(rèn)參考方法（例如：以HEp-2細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)基質(zhì)的IIF法是進(jìn)行總ANA檢測的參考方法和首選方法）進(jìn)行比對，與參考方法進(jìn)行比對有助于科學(xué)評價(jià)考核試劑的性能特性，尤其在與已上市產(chǎn)品方法學(xué)/技術(shù)學(xué)原理方面存在較大差異的時(shí)候。

對于某些目前臨床上尚不存在明確的臨床參考標(biāo)準(zhǔn)、亦無同類產(chǎn)品上市的新ANA標(biāo)志物，臨床試驗(yàn)研究者應(yīng)依據(jù)現(xiàn)有臨床實(shí)踐和理論基礎(chǔ)，建立目前公認(rèn)、合理的方法，進(jìn)行比較研究。臨床試驗(yàn)方法的選擇應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品預(yù)期用途、檢測結(jié)果的性質(zhì)（定性或定量等）以及臨床參考標(biāo)準(zhǔn)和對比試劑的可獲得性等因素進(jìn)行綜合考慮，臨床試驗(yàn)結(jié)論應(yīng)能夠支持預(yù)期用途描述的內(nèi)容。

2.樣本選擇

建議選擇產(chǎn)品可報(bào)告范圍內(nèi)，不同ANA濃度水平的臨床樣本進(jìn)行評估，包括接近c(diǎn)ut-off值濃度的樣本。凍存（回顧性）樣本如包括相關(guān)信息（如性別、年齡、臨床診斷等），也可用于這些研究。對樣本入選的納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)進(jìn)行詳盡的描述。

對于多項(xiàng)目聯(lián)合檢測試劑，每一個(gè)檢測項(xiàng)目應(yīng)分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，且應(yīng)滿足至少200例的要求，對于每一個(gè)檢測項(xiàng)目病例選擇中應(yīng)包括一定數(shù)量的交叉反應(yīng)樣本，以評價(jià)產(chǎn)品檢測的特異性。

對于適用于對多個(gè)樣本類型進(jìn)行檢測的產(chǎn)品，如不同樣本類型之間具有可比性，應(yīng)至少完成一個(gè)樣本類型不少于200例的臨床研究，同時(shí)再進(jìn)行不少于100例同源樣本的比較研究。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對于定性和半定量檢測試劑至少應(yīng)計(jì)算陽性符合率、陰性符合率、總符合率，并以四格表的形式進(jìn)行列表，并對結(jié)果進(jìn)行Kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證檢測結(jié)果的一致性。

對于半定量檢測產(chǎn)品還應(yīng)對檢測的分級結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，明確分級存在差異的樣本數(shù)量和分級差異情況，同時(shí)提供樣本檢測結(jié)果的頻率分布圖。

對于定量檢測試劑除計(jì)算陽性符合率、陰性符合率、總符合率外，還應(yīng)進(jìn)行相關(guān)性分析，給出相關(guān)系數(shù)，進(jìn)行回歸分析，給出回歸方程和試驗(yàn)數(shù)據(jù)的散點(diǎn)圖，回歸分析結(jié)果應(yīng)包括斜率、截距以及95%的置信區(qū)間。

4.結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

對于兩種試劑的檢測結(jié)果有不一致（檢測結(jié)果差異較大）的樣本，應(yīng)采用臨床上公認(rèn)較好的第三種同類試劑進(jìn)行復(fù)核，同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情、臨床資料對差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析。

對于半定量檢測產(chǎn)品，在檢測結(jié)果陰陽性判定一致的情況下，如分級差異等于或大于2個(gè)級別，應(yīng)采用第三種方法進(jìn)行復(fù)核。

5.交叉反應(yīng)樣本的比較

對于選擇的交叉反應(yīng)樣本應(yīng)單獨(dú)列出并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，應(yīng)對檢測結(jié)果進(jìn)行詳細(xì)描述，并對可能產(chǎn)生交叉反應(yīng)的原因進(jìn)行詳盡描述。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料

申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個(gè)環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯(cuò)誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險(xiǎn)的估計(jì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析，應(yīng)符合YY/T 0316-2016《醫(yī)療器械 風(fēng)險(xiǎn)管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。如果申報(bào)產(chǎn)品已有適用的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則產(chǎn)品技術(shù)要求的內(nèi)容應(yīng)不低于適用標(biāo)準(zhǔn)。至少應(yīng)包括以下性能指標(biāo)：

1.定性檢測試劑：物理性狀、陰性/陽性參考品符合率、精密度、檢測限等。

2.半定量檢測試劑：物理性狀、陰性/陽性參考品符合率、相關(guān)性、精密度、檢測限等。

3.定量檢測試劑：物理性狀、準(zhǔn)確度、線性、精密度、檢測限等。

針對多項(xiàng)目聯(lián)合檢測試劑，每個(gè)項(xiàng)目均須進(jìn)行陽性參考品符合率和精密度的檢測。性能指標(biāo)及檢驗(yàn)方法中應(yīng)明確寫明陽性參考品所包含的檢測項(xiàng)目。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗(yàn)報(bào)告

根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》要求，首次申請注冊的第二類產(chǎn)品應(yīng)該在國家食品藥品監(jiān)督管理部門認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機(jī)構(gòu)進(jìn)行樣品的注冊檢驗(yàn)。由其出具檢驗(yàn)報(bào)告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價(jià)意見。

（十一）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽

產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽應(yīng)滿足《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號）和《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求。下面對抗核抗體檢測試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行闡述。

1.【預(yù)期用途】

至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1試劑盒用于體外定性和/或半定量和/或定量檢測人血清和/或血漿樣本中的抗核抗體或針對靶抗原的特異性自身抗體。上述內(nèi)容均應(yīng)有相應(yīng)的分析性能評估資料和臨床評價(jià)資料支持。對于多項(xiàng)目聯(lián)合檢測試劑，應(yīng)逐項(xiàng)列明所檢測的具體靶抗原特異性自身抗體項(xiàng)目。

1.2適用人群特征介紹：例如高危人群，臨床疑似或已診斷AID疾病的人群。

1.3說明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥及背景情況。應(yīng)針對每個(gè)可報(bào)告靶抗原特異性自身抗體項(xiàng)目進(jìn)行編寫。說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法。

2.【主要組成成分】

2.1說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度信息。如含有生物源性物質(zhì)，應(yīng)說明其生物學(xué)來源、活性及其他特性；說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

2.2校準(zhǔn)品、質(zhì)控品（陰/陽性對照品）（如有），應(yīng)明確具體基質(zhì)成分，此外，校準(zhǔn)品應(yīng)明確溯源性，質(zhì)控品應(yīng)提交靶值單。

2.3試劑盒中不包含但對該項(xiàng)檢測必須的組分，應(yīng)列出相關(guān)試劑的名稱、貨號及其他相關(guān)信息。

3.【儲(chǔ)存條件及有效期】

詳細(xì)介紹試劑盒的效期穩(wěn)定性、開封/開瓶穩(wěn)定性等信息。注明生產(chǎn)日期、使用期限或失效日期。

4.【樣本要求】

4.1樣本的類型：明確適用的樣本類型以及所用的抗凝劑或保護(hù)劑（如適用）。

4.2樣本的穩(wěn)定性：明確樣本采集后和處理后的保存條件和期限等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需恢復(fù)至室溫、凍融次數(shù)的要求。

5.【檢驗(yàn)方法】

應(yīng)詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

5.1試驗(yàn)準(zhǔn)備：檢測試劑及樣本的復(fù)溫要求及相關(guān)注意事項(xiàng)。

5.2試劑配制方法、注意事項(xiàng)。

5.3高濃度樣本的稀釋方法及注意事項(xiàng)，應(yīng)注明經(jīng)過確認(rèn)的稀釋步驟。

5.4試驗(yàn)條件：操作步驟、溫度、時(shí)間等以及試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)。

5.5校準(zhǔn)程序（如適用）：校準(zhǔn)品的準(zhǔn)備和使用，校準(zhǔn)曲線的繪制方法。

5.6質(zhì)量控制程序：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗(yàn)有效性的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。

5.7試驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算或讀?。涸敿?xì)描述對檢測結(jié)果的判定或計(jì)算方法、對質(zhì)控品（陰/陽性對照品）的檢測結(jié)果要求（試驗(yàn)有效性的判斷）等。

6.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

說明可能對試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響的因素；明確對于可疑區(qū)間或灰區(qū)樣本是否需要進(jìn)行重復(fù)測試，如需要，測試樣本是否為同一個(gè)樣本，或者重新采集新鮮樣本。

7.【檢驗(yàn)方法局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測方法等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明，申請人選擇適用的條款在產(chǎn)品說明書中予以闡述。

7.1本產(chǎn)品檢測結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為臨床診治的唯一依據(jù)，應(yīng)結(jié)合患者性別、年齡、病史及其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)等信息綜合考慮。當(dāng)檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析查找原因并重新確認(rèn)等。

7.2健康人群（包括孕婦、老年人等）或感染性疾病、肝臟疾病、腫瘤性疾病等多種疾病患者可能出現(xiàn)ANA抗體低滴度弱陽性的情況。

7.3一些自身抗體陽性的患者可能并未出現(xiàn)臨床癥狀。

7.4陰性結(jié)果并不能排除自身免疫性疾病的可能。

7.5 ANA相關(guān)抗體缺失，針對高度可溶性抗原的自身抗體（如抗SSA抗體）、針對含量極少的胞質(zhì)靶抗原（如抗Jo-1抗體）等情況，甚至可能存在系統(tǒng)性自身免疫病患者IIF-ANA檢測結(jié)果陰性，而針對靶抗原的特異性自身抗體檢測結(jié)果陽性的情況。

7.6有關(guān)假陽性結(jié)果的可能性原因分析，如某些含普魯卡因酰胺或肼苯噠嗪的藥物；或假陰性結(jié)果，如鉤狀效應(yīng)，或由于多種抗體同時(shí)存在時(shí)，核免疫熒光染色模式的掩蓋效應(yīng)。

7.7其他可能存在的問題。

8.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

8.1由于方法學(xué)或抗體特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣本進(jìn)行檢測可能會(huì)得到不同的測試結(jié)果，因此，用不同試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋，建議實(shí)驗(yàn)室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報(bào)告中注明所用試劑特征。

8.2對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待，提示操作者采取必要的防護(hù)措施。

三、審查關(guān)注點(diǎn)

（一）產(chǎn)品技術(shù)要求中性能指標(biāo)的設(shè)定及檢驗(yàn)方法是否符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求；產(chǎn)品技術(shù)要求的格式是否符合《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的相關(guān)規(guī)定。

（二）產(chǎn)品說明書的編寫內(nèi)容及格式是否符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，相關(guān)內(nèi)容是否符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號）中對說明書的要求。

（三）分析性能評估指標(biāo)及結(jié)果是否滿足本指導(dǎo)原則中各指標(biāo)驗(yàn)證的要求。

（四）參考區(qū)間確定使用的方法是否合理，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)是否符合統(tǒng)計(jì)學(xué)的相關(guān)要求，結(jié)論是否和說明書聲稱一致。

（五）試劑盒的穩(wěn)定性研究方法是否合理，穩(wěn)定性結(jié)論是否和說明書聲稱的一致。

四、編制單位

浙江省醫(yī)療器械審評中心。