附件：環(huán)孢霉素和他克莫司檢測試劑注冊審查指導原則（2022年第35號）.doc

環(huán)孢霉素和他克莫司檢測試劑注冊審查指導原則

本指導原則旨在為醫(yī)療器械注冊申請人進行環(huán)孢霉素和他克莫司檢測試劑的注冊申報提供技術指導，同時也為醫(yī)療器械監(jiān)督管理部門對注冊申報資料的審評提供技術參考。

本指導原則是對該類試劑注冊申報資料的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。如注冊申請人認為有必要增加本指導原則不包含的研究內容，可自行補充。

本指導原則是供注冊申請人和技術審評人員使用的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料。需在遵循相關法規(guī)和強制性標準的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準的不斷完善和科學技術的不斷發(fā)展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。

一、適用范圍

環(huán)孢霉素和他克莫司檢測試劑是指用于體外定量檢測人體全血中環(huán)孢霉素和他克莫司含量的試劑。

本指導原則適用于以化學發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法、熒光免疫層析法、（超）高效液相色譜-串聯(lián)質譜法、免疫比濁法等方法對人全血中環(huán)孢霉素和他克莫司進行定量檢測的體外診斷試劑。其他方法學的環(huán)孢霉素和他克莫司檢測試劑注冊可參照本指導原則，但應根據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內容是否適用。

本指導原則適用于進行首次注冊申報和相關許可事項變更的產(chǎn)品。

二、注冊審查要點

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品名稱一般由三部分組成。第一部分：被測物名稱為環(huán)孢霉素和他克莫司;第二部分：用途，如測定試劑或檢測試劑;第三部分：方法或者原理，如免疫比濁法、化學發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法、熒光免疫層析法等。

2.分類依據(jù)

根據(jù)《體外診斷試劑分類子目錄》，環(huán)孢霉素和他克莫司檢測試劑管理類別為Ⅱ類，分類編碼為6840。

3.注冊單元劃分

應符合《醫(yī)療器械注冊單元劃分指導原則》中體外診斷試劑注冊單元劃分相關要求。

4.產(chǎn)品列表

以表格形式列出擬申報產(chǎn)品的包裝規(guī)格、主要組成成分，以及每個包裝規(guī)格的標識（如貨號、器械唯一標識等）和描述說明。

5.關聯(lián)文件

應由境內（外）申請人提供相關證明材料和文件、主文檔授權信（如適用）。授權信中應當包括引用主文檔的申請人信息、產(chǎn)品名稱、已備案的主文檔編號、授權引用的主文檔頁碼/章節(jié)信息等內容。

6.既往溝通記錄

在產(chǎn)品申報前，如果申請人與監(jiān)管機構針對申報產(chǎn)品以會議形式進行了溝通，或者申報產(chǎn)品與既往注冊申報相關。應當提供相關內容（如適用）。

如不適用，應當明確聲明申報產(chǎn)品沒有既往申報和/或申報前溝通。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品技術原理、主要生產(chǎn)工藝等、包裝、研發(fā)歷程、預期用途、預期使用環(huán)境、臨床適應證、不良事件情況等內容。

1.概述

根據(jù)《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》和原《食品藥品監(jiān)管總局關于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》，應當描述環(huán)孢霉素和他克莫司檢測試劑通用名稱及其確定依據(jù);描述產(chǎn)品管理類別為Ⅱ類，分類編碼為6840，明確所屬分類子目錄名稱;描述申報產(chǎn)品預期用途;描述有關申報產(chǎn)品的背景信息概述或特別細節(jié)，如：申報產(chǎn)品的歷史概述、歷次提交的信息，與其他經(jīng)批準上市產(chǎn)品的關系等。

2.產(chǎn)品描述

應提供產(chǎn)品所采用的技術原理，產(chǎn)品組成，原材料的來源及制備方法，主要生產(chǎn)工藝，檢驗方法，質控品的制備方法及賦值情況，如產(chǎn)品檢測需要進行校準，應提供校準品的制備方法及溯源情況。應提供產(chǎn)品主要研究結果的總結和評價，包括分析性能評估、參考區(qū)間（如適用）、穩(wěn)定性以及臨床評價等。提供不同包裝規(guī)格之間的差異。提供產(chǎn)品中使用的生物材料或衍生物（如適用），包括生物學來源（如人、動物、病原體、重組或發(fā)酵產(chǎn)物）和組織來源（如血液）。其他動物源及微生物來源的材料，應當說明其在產(chǎn)品運輸、使用過程中對使用者和環(huán)境是安全的，并提供相關的文件。

應提供有關產(chǎn)品包裝的信息，包括包裝形狀和材料。

應闡述申請注冊產(chǎn)品的研發(fā)背景和目的。如有參考的同類產(chǎn)品或前代產(chǎn)品，應當提供同類產(chǎn)品和/或前代產(chǎn)品的信息，并說明選擇其作為研發(fā)參考的原因。提供與同類和/或前代產(chǎn)品的比較情況。

3.預期用途

用于體外定量檢測人體全血中環(huán)孢霉素和他克莫司的含量。應明確適用儀器及使用方法（自動/半自動），樣本采集及保存裝置和/或添加劑（如抗凝劑）使用情況。

環(huán)孢霉素和他克莫司作為常用的免疫抑制劑，主要用于抗器官移植排斥反應，還可應用于治療某些自身免疫性疾病，臨床應用較廣。由于環(huán)孢霉素和他克莫司生物利用度個體差異大，血藥濃度與療效及毒性密切相關，且血藥濃度易被多方面因素影響，定時對患者體內環(huán)孢霉素和他克莫司的血藥濃度監(jiān)測，制定個體化給藥方案，對提高器官移植的存活率，促進環(huán)孢霉素和他克莫司在臨床的合理應用具有重要的臨床意義。

應當明確產(chǎn)品預期使用者（專業(yè)或非專業(yè)）和預期使用環(huán)境（地點及環(huán)境條件等）。

4.提供申報產(chǎn)品上市歷史情況（如適用）。

5.其他。

除申報產(chǎn)品外，檢測系統(tǒng)的其他組成部分，包括但不限于：樣本處理用試劑、適用儀器、獨立軟件等基本信息，及其在檢測中發(fā)揮的作用，必要時應提交相應的說明書。

對于已獲得批準的檢測系統(tǒng)的其他組成部分，應當提供注冊證編號和國家藥監(jiān)局官方網(wǎng)站公布的注冊證信息。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品風險管理資料

申請人應考慮產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從預期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關的特征、已知及可預見的危害等方面的判定以及對患者風險的估計進行風險分析，應符合YY/T 0316 《醫(yī)療器械風險管理對醫(yī)療器械的應用》的要求。

應當提供風險分析、風險評價、風險控制、任何一個或多個剩余風險的可接受性評定、與產(chǎn)品受益相比，綜合評價產(chǎn)品風險可接受等內容，并說明對于每項已判定危害的下列各個過程的可追溯性。

尚不清楚環(huán)孢霉素和他克莫司產(chǎn)品對患者健康造成的直接風險。但是，無法正確進行測試或結果解釋存在錯誤可能對患者造成不當管理風險。錯誤的低報環(huán)孢霉素或他克莫司測定結果可能會作出將劑量升高到超出治療獲益劑量的決定，這可能會增加藥物毒性風險。而錯誤的高報環(huán)孢霉素或他克莫司測定結果可能作出將劑量降低到免疫抑制所需劑量之下的決定，這可能增加植入器官排斥的風險。對于環(huán)孢霉素或他克莫司，目前尚無固定的治療范圍?；颊叩淖罴阎委煼秶Q于諸多因素，如移植物類型、患者敏感性、合并用藥和移植后的時間以及所采用具體商業(yè)化分析的代謝物交叉反應性。因此，根據(jù)測定結果來調整治療方案而不考慮其它臨床因素可能構成一定的風險。

進行風險分析時，應識別出產(chǎn)品的其它特定風險，并對風險分析方法進行描述。如果可以選擇使用其它方法來解決所識別出的特定風險，或已識別出不同于本指南中風險的其它風險，應提供詳細信息來支持所采用的、解決該風險的方法。

2.體外診斷試劑安全和性能基本原則清單

說明產(chǎn)品符合《體外診斷試劑安全和性能基本原則清單》各項適用要求所采用的方法，以及證明其符合性的文件。對于其中不適用的各項要求，應當說明理由。

3.產(chǎn)品技術要求及檢驗報告

產(chǎn)品技術要求應按照《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》和編制要求的相關規(guī)定進行編寫。同時結合產(chǎn)品具體適用的指導原則或相關國家標準、行業(yè)標準以及產(chǎn)品的特點，明確保證產(chǎn)品安全、有效、質量可控的各項性能指標和檢驗方法。

3.1適用的產(chǎn)品標準

產(chǎn)品應當符合適用的強制性標準。對于強制性行業(yè)標準，若申報產(chǎn)品結構特征、技術原理、預期用途、使用方式等與強制性標準的適用范圍不一致，申請人應當提出不適用強制性標準的說明，并提供經(jīng)驗證的證明性資料。

3.2.產(chǎn)品技術要求

3.2.1主要性能指標

該產(chǎn)品作為定量檢測試劑主要包括以下性能指標：試劑的外觀、裝量、空白限、檢出限及定量限、準確度/正確度、線性區(qū)間、精密度、高劑量鉤狀效應、特異性、穩(wěn)定性等，校準品的性狀、裝量（液體適用）、水分含量（干粉適用）、賦值結果及其不確定度的表示方式、正確度、均勻性、穩(wěn)定性等，質控品的外觀、裝量、預期結果、均勻性、穩(wěn)定性等。具體產(chǎn)品的性能指標需結合方法學本身特性，確定其性能指標或者提供此指標不適用的說明。

3.2.2檢驗方法

產(chǎn)品的檢驗方法需根據(jù)技術性能指標設定，檢驗方法需優(yōu)先采用公認的或已頒布的標準檢驗方法;自建檢驗方法需提供相應的方法學依據(jù)及理論基礎，同時保證檢驗方法具有可操作性和可重現(xiàn)性，必要時可附相應圖示進行說明，文本較大的可以附錄形式提供。

3.3產(chǎn)品檢驗報告

在保證產(chǎn)品原材料和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可靠的基礎上，采用在符合醫(yī)療器械質量管理體系相關要求的條件下生產(chǎn)的產(chǎn)品進行檢驗。有適用的國家標準品的，應當使用國家標準品對產(chǎn)品進行檢驗?？商峤灰韵氯我恍问降臋z驗報告：

3.3.1申請人出具的自檢報告。

3.3.2委托有資質的醫(yī)療器械檢驗機構出具的檢驗報告。

如產(chǎn)品提交自檢報告，還需按照《醫(yī)療器械注冊自檢管理規(guī)定》的要求提交相應資料。

4.分析性能研究

分析性能評估主要包括樣本穩(wěn)定性，適用的樣本類型，校準品的量值溯源和質控品的賦值，準確度/正確度，精密度，空白限、檢出限及定量限，分析特異性，高劑量鉤狀效應，測量區(qū)間及可報告區(qū)間，反應體系等項目的研究資料，應當采用多批產(chǎn)品進行性能評估。

如果試劑適用不同的機型，需要在不同機型上（酶標儀除外）分別進行性能評估。應采用一個或多個機型，進行充分的試劑分析性能建立研究，對于其他機型，應分析各適用機型的工作原理、檢測方法、反應條件控制、信號處理等，如基本相同，可基于風險分析對已建立的分析性能指標進行合理驗證。所有適用機型驗證的分析性能應基本一致，如不同機型對某一檢測項目的某一分析性能存在差異，應針對該差異采用不同機型進行充分的分析性能建立研究。如申報產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對各包裝規(guī)格進行分析或驗證。

主要原材料和生產(chǎn)工藝經(jīng)過選擇和確認后，在有效質量管理體系下生產(chǎn)的質量穩(wěn)定的體外診斷試劑產(chǎn)品，方可進行性能評估，用于注冊申報。

申請人應當提交對試劑進行的全部性能評估資料，包括前處理、具體研究方法、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法、研究結論等。應當遵循相應的質量控制和校準程序，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。

4.1.一般研究建議

由于患者樣本能真實反映游離藥物和結合藥物、代謝產(chǎn)物以及其他合并服用的藥物對產(chǎn)品檢測結果的影響，性能評估時應盡可能納入預期使用人群（即攝入環(huán)孢霉素或他克莫司的患者）的樣本進行評價。確需使用加標樣本進行研究時，應提供關于藥品純度、代謝產(chǎn)物或潛在干擾物質、樣品類型的信息等。添加分析物時，加入體積應盡可能少（原則上少于總體積的10%）;添加干擾/交叉物質時，應盡量使用接近體內循環(huán)形式的樣品（加入體積不超過5%）或純品。還應確保在每項分析中都包含所有的分析步驟（如細胞裂解、提取和離心等）。

一般應有研究方案和研究報告，清晰描述研究目的，試驗地點和方法，試驗采用的具體試劑名稱、規(guī)格和批次，儀器名稱和型號，樣本類型、來源、處理方法、基質類型及背景信息等，體現(xiàn)結果數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析過程及結果。

分析性能評估的結果應在產(chǎn)品說明書中進行描述，合理聲稱產(chǎn)品性能。

4.2對于本試劑，建議著重對以下性能進行研究：

4.2.1樣本穩(wěn)定性

應充分考慮實際使用過程中樣本采集、處理、運輸及保存等各個階段的條件，對樣本的穩(wěn)定性進行評價并提交研究資料。內容包括建議的保存條件、允許的凍融周期、添加劑（如抗凝劑）和運輸條件（如涉及）等。樣本穩(wěn)定性內容的研究結果應在說明書【樣本要求】中進行詳細說明。

4.2.2適用的樣本類型

目前該類產(chǎn)品公認的樣本類型是全血樣本。

4.2.3校準品的量值溯源和質控品的賦值

應明確申報產(chǎn)品適用的校準品和質控品。提供試劑配套校準品量值溯源相關資料，提供質控品賦值及其質控范圍確定的相關資料（應當提交在所有適用機型上進行賦值和驗證的資料）。同時，至少應對校準品的正確度、質控品的可接受區(qū)間/值（預期結果）以及校準品/質控品的均勻性進行性能評估。如校準品/質控品的基質不同于臨床常用樣本類型，還應提交基質效應研究資料。

4.2.4正確度

正確度（trueness）指無窮多次重復測量所得量值的平均值與一個參考量值間的一致程度。正確度由系統(tǒng)測量誤差決定，通常用偏倚表示。

可采用方法學比對（與對比試劑、參考測量程序或診斷準確度標準比較）、參考物質檢測或回收試驗等方式。

4.2.4.1使用參考物質的正確度評價。

推薦的參考物質包括：具有互換性的有證參考物質/公認的參考品、標準品，參考測量程序/參考方法賦值的臨床樣本。參考物質的值可作為參考量值，評估試劑檢測結果的偏倚。

采用至少兩個水平的參考物質，代表試劑測量范圍的高、低濃度，進行重復檢測（至少3～5重復）。

4.2.4.2使用患者樣本的正確度評價

使用患者樣本的正確度評價需要選取合理的比較方法，首選參考方法，如果參考方法難以獲得，可選擇比申報試劑具有更低不確定度的其他方法。申報試劑和比較方法同時檢測患者樣本，通過比較兩種方法之間的系統(tǒng)誤差，進行申報試劑的正確度評價。應在多天進行檢測，患者樣本的濃度水平應覆蓋申報試劑的測量范圍并盡量均勻分布。

4.2.4.3回收試驗

將已知量的環(huán)孢霉素或他克莫司添加到不含藥物或含有已知藥物濃度的臨床樣本中（包括向服用環(huán)孢霉素或他克莫司患者樣本中加標），配制成回收樣品，進行檢測。加標樣本的終濃度應覆蓋大部分的線性范圍。

標準溶液/高濃度參考物質的體積與臨床樣本的體積比應不會產(chǎn)生基質的變化，一般前者體積不超過總體積的10%。

檢測至少三個水平的回收樣品，代表試劑測量范圍的高、中、低濃度，每個濃度重復檢測（至少3～5重復）。

4.2.5精密度

精密度由隨機測量誤差決定，通常用標準差、方差或變異系數(shù)表示。精密度包括重復性、中間精密度和再現(xiàn)性。重復性即相同操作者、相同試劑、相同操作條件、相同設備、相同地點，并在短時間段內完成檢測。再現(xiàn)性又稱實驗室間精密度，表示上述影響因素變化最大的情況，即不同地點、不同操作者、不同設備。重復性和再現(xiàn)性是精密度的兩種極端情形，在這兩種極端情形之間的精密度，稱為中間精密度（相同地點、不同時間、其他影響因素亦可發(fā)生變化），日間精密度，設備內精密度、實驗室內精密度均屬于中間精密度。

建議對檢測范圍內至少3個濃度水平的精密度進行評估。3個濃度分別為（a）治療效果不佳范圍或可報告范圍下限，（b）在治療范圍內的濃度，以及（c）接近可報告范圍或毒性范圍的濃度。精密度研究可能涉及多天、多地點檢測，應確保樣本的穩(wěn)定性和一致性，可將樣本等分保存。具體研究方法建議參考相關文件等。

研究時應注意樣本類型（例如，患者樣品、加標樣本等）、時間（天數(shù)、運行次數(shù)）、儀器、運行/分析批（run）、地點、環(huán)境條件（實驗室溫度、濕度、空氣質量、管理等條件）、校準（校準品批次，校準周期）、試劑批次、操作者等對研究結果的影響。

4.2.6分析特異性

應評估分析待測樣本中和試劑使用過程中潛在的交叉反應和干擾物質，并對干擾和交叉的程度進行量化。

4.2.6.1 交叉反應研究

環(huán)孢霉素包含的代謝物有AM1，AM4n，AM9，AM19，AM1c，AM1c9。他克莫司包含的代謝物有MI，MII，MIII，MIV，MV，MVI，MVII，MVIII。應當盡可能對以上代謝物進行研究。這些研究涉及將代謝物加標到不含藥物的全血中，對加標樣品的重復性進行評估并對所用代謝物的濃度進行描述。

4.2.6.2干擾物質研究

干擾物質研究應當考慮常見的內源性干擾、外源性干擾和已有報道的干擾物質等對產(chǎn)品檢測結果的影響。

該類產(chǎn)品常見的干擾物包括但不限于以下物質：

（1）常見的內源性干擾物質包括膽紅素、甘油三酯、膽固醇、尿酸、類風濕因子、血細胞容積率、白蛋白、丙種球蛋白、人抗鼠抗體等。

（2）常見的外源性干擾物質包括樣本添加劑（抗凝劑或防腐劑）、常見的合并用藥包括但不限于：環(huán)孢霉素、他克莫司、霉酚酸及其代謝物（MPAG）、雷帕霉素、一般非處方藥等。

在對這些干擾物質進行檢測時，首先對可疑干擾物質采用相對較高的濃度進行干擾篩查，可采用配對的方法，比較含有干擾物質的樣本與不含干擾物質的樣本（對照）檢測結果的差異。如果差異超出接受范圍或存在臨床顯著性影響，可確認該物質為干擾物質，應進一步評估該干擾物質濃度與干擾程度之間的關系;如果差異在接受范圍內或對臨床無顯著性影響，可認為該濃度的物質不產(chǎn)生干擾，應明確不產(chǎn)生干擾的物質濃度上限。在對可疑干擾物質進行干擾篩查時，建議采用至少兩個被測物水平的樣本，應包括醫(yī)學決定水平。在評估干擾物質濃度與干擾程度之間關系時，可適當增加樣本數(shù)量，納入更多被測物水平的樣本。

申請人除按照上述方法采用添加干擾物的樣本進行研究外，亦可采用病人標本通過對比申報試劑與其他測量程序的檢測結果，進行干擾影響的評價。

說明書中聲稱的非干擾物質，需明確其干擾接受標準，例如可描述為：當環(huán)孢霉素濃度為x ng/mL時，干擾物質所引起待測物測定結果偏差小于y %。如果通過文獻或其它來源得知任何潛在的干擾物會干擾檢測系統(tǒng)的結果，則不需要對這些已知干擾物進行干擾研究，但應在產(chǎn)品說明書中予以明確。

4.2.7高劑量鉤狀效應（如適用）

一些免疫測定方法可能表現(xiàn)出“高劑量鉤狀效應”，即在高濃度時，待測物濃度與響應度呈現(xiàn)出與校準曲線相反的數(shù)量關系。在適用情況下（例如，雙位點或夾心免疫測定法），應將線性區(qū)間研究擴展到可報告區(qū)間之外，達到可能在臨床條件下遭遇的最高濃度，以評估該試劑是否存在高劑量鉤狀效應并提交研究資料。

4.2.8線性區(qū)間與可報告區(qū)間

首先應通過對濃度已知的樣本進行評估以確定檢測的線性區(qū)間。選擇的樣本濃度應均勻分布在試驗的線性區(qū)間內，適當?shù)闹貜痛螖?shù)和濃度水平取決于檢測的可報告區(qū)間。建議選擇7到11個不同濃度的樣本（建議用高值和零濃度/低值濃度的樣本按比例精確配制），比預期的線性區(qū)間寬20～30%，每個濃度樣本檢測2～4次。評價檢測結果是否呈線性可采用多項式回歸的統(tǒng)計方法，或根據(jù)產(chǎn)品特性選擇其他方法。逐漸減少濃度點，直到有可接受的線性區(qū)間。

對于跨越更寬濃度范圍的環(huán)孢霉素，應對額外濃度水平進行評估（例如，以50ng/mL為增量）。

如對超出線性區(qū)間的濃度樣本可進行稀釋后檢測，應研究適用的稀釋液和聲稱的稀釋倍數(shù)，從而確定試劑的可報告區(qū)間。

4.2.9空白限（LoB）、檢出限（LoD）與定量限（LoQ）

實際研究中應根據(jù)產(chǎn)品方法學不同選擇不同的評價指標，至少應做定量限的建立和驗證。

4.2.9.1空白限、檢出限與定量限的建立

LoB一般由多個獨立空白樣本（無分析物）的檢測結果，經(jīng)計算獲得;LoD一般由多個獨立的低濃度（含有分析物）樣本的檢測結果，結合LoB進行計算獲得，應根據(jù)具體產(chǎn)品的原理、檢測結果差異和分布，選擇合適的模型和分析方法（非參數(shù)/參數(shù)數(shù)據(jù)）進行計算。LoQ應考慮總誤差（偏倚和精密度）的要求。偏倚可通過檢測具有可接受參照值的樣本或回收試驗進行估計。

在某些情況下，如無法在合適的低水平分析物濃度下確定偏倚，可采用其他合理的替代方法評估LoQ，例如研究試劑精密度達到特定要求時的最低分析物濃度。建議僅在無法確定偏倚時采用替代方法，并且應設置較為嚴格的精密度要求。

LoB，LoD，LoQ的研究需選擇多個樣本（空白樣本、低濃度水平樣本、已知濃度的低水平樣本），在多天內進行研究。

4.2.9.2空白限、檢出限與定量限的驗證

每個項目需選擇至少2個樣本（空白樣本、檢出限濃度樣本、定量限濃度樣本），在多天內進行試驗。每個試劑批次至少需要獲得20個檢測結果，計算與4.2.9.1研究獲得的LoB，LoD，LoQ呈現(xiàn)一致性的檢測結果比例，如果比例符合統(tǒng)計學要求/預設的臨界值，則LoB，LoD，LoQ得到驗證。

4.2.10反應體系

本產(chǎn)品注冊申報時無需提交;由申請人保存，技術審評需要時應提交。

反應體系研究資料包括樣本的制備方式（采集和處理）、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應條件、校準方法（如有）、質控方法、結果判讀方式等。

5.穩(wěn)定性研究

一般應包含研究方案、報告和數(shù)據(jù)。

5.1實時穩(wěn)定性（貨架有效期）

提交至少三批申報產(chǎn)品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的實時穩(wěn)定性研究資料。明確儲存的環(huán)境條件（如溫度、濕度和光照）及有效期。

5.2使用穩(wěn)定性

提交申報產(chǎn)品實際使用期間穩(wěn)定性的研究資料，應包括所有組成成分的開封穩(wěn)定性。適用時提交復溶穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性及凍融次數(shù)研究資料等。如涉及校準品，還應提交校準頻率或校準穩(wěn)定性研究資料。明確產(chǎn)品使用的溫度、濕度條件等。

5.3運輸穩(wěn)定性

提交申報產(chǎn)品可在特定或者預期的條件下運輸?shù)难芯抠Y料，應說明產(chǎn)品正確運輸?shù)沫h(huán)境條件（如溫度、濕度、光照和機械保護等）。同時說明產(chǎn)品的包裝方式以及暴露的最差運輸條件。

試劑穩(wěn)定性內容的研究結果應在說明書【儲存條件及有效期】中進行詳細說明。

6.參考區(qū)間和治療范圍

對于正常未使用相應藥物的人群樣本中無可檢出的特定藥物及其代謝產(chǎn)物，因此此類試劑不涉及參考范圍的內容。

治療范圍濃度取決于所采用的方法學和個體患者的臨床狀態(tài)，無法確定環(huán)孢霉素和他克莫司具體的治療范圍。但應當結合權威文獻或研究內容說明缺少確定的治療范圍的警告性解釋，并就患者差異和測試差異進行討論。例如：

環(huán)孢霉素/他克莫司無確定的治療范圍。臨床狀態(tài)復雜程度、個體對于環(huán)孢霉素/他克莫司的免疫抑制和效應敏感性的差異、合并使用其它免疫抑制劑、移植物類型、移植后時間和許多其它因素導致對藥物最佳血液水平的要求不同。因此，不得將個體的數(shù)值作為變更治療方案的唯一指標，并且，在改變治療方案前，應對每名患者進行充分的臨床評估并根據(jù)臨床經(jīng)驗來確立自己的范圍。

7.其他資料

7.1主要原材料研究資料和生產(chǎn)工藝研究資料（如適用）

主要原材料的研究資料包括主要原材料的來源、選擇、制備方法的研究資料，質量分析證書，主要原材料質量標準的制定和檢驗資料。如適用，提交企業(yè)參考品的研究資料，包括來源、組成、陰陽性和/或量值確認等。

生產(chǎn)工藝的研究資料包括工作液的配制、分裝和凍干,固相載體的包被，結合物的制備，顯色/發(fā)光等結果放大系統(tǒng)的確定等。

7.2三批產(chǎn)品的生產(chǎn)及自檢記錄。

7.3證明產(chǎn)品安全性、有效性的其他非臨床研究資料。

（四）臨床評價資料

環(huán)孢霉素和他克莫司測定試劑已經(jīng)列入《關于發(fā)布免于臨床試驗體外診斷試劑目錄的通告》免于進行臨床試驗的體外診斷試劑目錄中。根據(jù)體外診斷試劑臨床評價的相關要求，申請人可按照《免于臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價技術指導原則》要求進行臨床評價。

申請人也可通過臨床試驗的方式進行產(chǎn)品的臨床評價，臨床試驗的倫理、方案的制定以及報告的撰寫等臨床試驗資料均應符合《關于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的通告》對臨床評價資料的規(guī)定。

下面僅對臨床評價中的重點問題進行闡述。

1.樣本要求

應選擇濃度覆蓋線性/測量區(qū)間的預期適用人群樣本和干擾樣本進行研究，并注意測量區(qū)間內的各個濃度水平均應包含一定數(shù)量的樣本。

樣本采集方式及穩(wěn)定性應符合待評價試劑和對比試劑說明書有關要求。原則上，應采用臨床真實樣本進行研究。當真實樣本濃度無法覆蓋檢測范圍時，應充分闡述無法獲得的依據(jù)，可適當采用稀釋或者經(jīng)處理去除分析物獲得低濃度樣本、添加分析物獲得高濃度樣本等人工制備樣本。人工制備樣本應充分考慮樣本的背景信息，基質效應等影響因素。

充分考慮不同治療方案（移植物等）、人群選擇、地域選擇、年齡范圍、移植后的時間和抽血時間（谷濃度及其他與給藥相關的時間點等）等與給藥相關的因素等內容，樣本應能夠充分評價產(chǎn)品臨床使用的安全性、有效性。

2.方法學比對

2.1與已上市同類試劑的比對：

應選擇境內已經(jīng)取得上市許可、目前臨床普遍認為質量較好的產(chǎn)品作為對比試劑，同時應充分了解對比試劑的技術信息，包括臨床預期用途、基本原理、性能指標等。建議企業(yè)盡量選擇方法學相同、線性區(qū)間及精密度等性能接近的同類試劑作為參比試劑。如免疫試驗法，可利用與新器械具有相似免疫分析技術的等同器械進行比較研究。

2.2與參考方法的比對：

鑒于與已上市同類試劑的比對所能提供的性能信息較為有限，且抗體對待檢藥物/化合物的反應性不同，以及考慮到交叉反應等因素，可利用高效液相色譜法（HPLC）、隨訪信息在內的臨床信息等作為參考測量程序或診斷準確度標準。應根據(jù)待測化合物特性選擇適宜的參考方法。

3.統(tǒng)計學分析

在完成數(shù)據(jù)收集后，應先繪制散點圖和差異圖，對數(shù)據(jù)進行分析和審查，觀察數(shù)據(jù)是否覆蓋了線性/測量區(qū)間以及是否存在離群值，并初步了解待評價試劑和對比試劑測量值之間的潛在變異特征，確定如何更好地表征這些差異。

然后根據(jù)散點圖和差異圖判斷數(shù)據(jù)是否滿足相應的假設前提，并據(jù)此確定最佳的回歸分析方法。常見的回歸分析方法包括Deming回歸、Passing-Bablok回歸分析和最小二乘回歸等，并對其進行假設檢驗以評價二者偏倚。

（五）產(chǎn)品說明書和標簽樣稿

說明書承載了產(chǎn)品預期用途、檢驗原理、檢驗方法、樣本要求、檢測結果的解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結果給出合理醫(yī)學解釋的重要依據(jù)。藥物檢測試劑通常用于藥物的濃度檢測，從而指導臨床用藥，鑒于其預期用途的特殊性，說明書中對預期用途的準確描述、對樣本要求與采集、檢驗結果的解釋、檢驗方法的局限性、注意事項等內容的解釋尤為重要，有助于使用者正確使用試劑，正確解讀結果。

產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應符合《醫(yī)療器械說明書和標簽管理規(guī)定》、《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》的要求。產(chǎn)品說明書的所有內容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關研究結果保持一致，如某些內容引用自參考文獻，則應以規(guī)范格式對此內容進行標注，并單獨列明參考文獻的相關信息。

以下內容僅對環(huán)孢霉素和他克莫司測定試劑說明書的重點內容進行詳細說明，說明書其他內容應根據(jù)《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》要求進行編寫。

1.【產(chǎn)品名稱】

試劑名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：環(huán)孢霉素和他克莫司測定試劑（化學發(fā)光法）、環(huán)孢霉素、他克莫司測定試劑盒（高效液相色譜-串聯(lián)質譜法）等。

2.【預期用途】

說明試劑（盒）用于體外定量測定人體全血中環(huán)孢霉素、他克莫司的含量。

應闡述與預期用途相關的臨床適應癥及背景情況，說明相關的臨床或實驗室診斷方法等。

3.【檢驗原理】

根據(jù)產(chǎn)品采用的方法學說明檢驗的原理，檢測原理的描述應結合產(chǎn)品主要組成成分、被測物和產(chǎn)物的關系進行描述，必要時可結合圖示方法描述。

4.【主要組成成分】

應明確以下內容：

4.1試劑盒提供的試劑組分的名稱、比例或濃度，各組分是否可以互換;如含有校準品或質控品，除明確組成成分及生物學來源外，校準品還應明確其定值及溯源性，溯源性應寫明溯源的最高級別，包括標準物質或參考物的編號，質控品應明確靶值范圍。

4.2對于非試劑組分，如試驗用耗材（如塑料滴管）、定值單（靶值單）、校準卡等，應注明相關信息。

4.3對于試劑盒中不包含，但對檢驗必需的試劑組分，應列出此類試劑的名稱、配制方法及其他相關信息。

5.【儲存條件及有效期】

應明確未開封的試劑實際儲存條件及有效期，如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致，則應對各組分的儲存條件和有效期分別進行描述。明確開封后的待機穩(wěn)定期或開瓶穩(wěn)定期。干粉試劑應明確復溶穩(wěn)定期。

增加“生產(chǎn)日期、使用期限或者失效日期見標簽”的字樣。

注：保存溫度不應有模糊表述，如“常溫”“室溫”，應直接以℃為單位;對于可以冷凍的試劑應注明凍融次數(shù)限制。

6.【樣本要求】

應在以下幾方面進行說明：

6.1適用的樣本類型。

6.2在樣本收集、處理過程中的特別注意事項。

6.3為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑或保護劑等。

6.4已知的干擾物。

6.5能夠保證樣本穩(wěn)定的儲存、處理和運輸方法。

6.6環(huán)孢霉素濃度具有晝夜節(jié)律變化，即夜間的谷水平顯著低于早晨的谷水平，應盡量保證每次抽血時間的一致性。

7.【檢驗方法】

詳細說明試驗操作的各個步驟及每一步驟時間和溫度要求。包括：

7.1試驗具體操作步驟及結果計算方式。

7.2試劑配制方法、注意事項。

7.3試驗條件：溫度、時間、儀器波長等以及試驗過程中的注意事項。

7.4校準：校準品的使用方法、注意事項、校準曲線的繪制。應注明推薦的儀器校準周期。

7.5質量控制：質控品的使用方法、對質控結果的必要解釋以及推薦的質控周期等，如質控不合格應提供相關的解決方案。

8.【參考范圍】

對于未使用相應藥物的正常人群樣本中無可檢出的特定藥物及其代謝產(chǎn)物，因此此類試劑不涉及參考范圍的內容。

企業(yè)可根據(jù)對于藥物治療范圍的研究進行描述。由于治療范圍取決于所采用的方法學和個體患者的臨床狀態(tài)，具體的治療范圍通常不適用于目前的環(huán)孢霉素和他克莫司檢測。

應對用戶說明缺乏確定的治療范圍的警告性解釋，并應就患者差異和測試差異進行討論。

9.【檢驗結果的解釋】

說明可能對試驗結果產(chǎn)生影響的因素;說明在何種情況下需要進行確認試驗。

若超過線性區(qū)間上限的高濃度樣本可稀釋后測定，則應說明樣本的最大可稀釋倍數(shù)、稀釋溶液等信息并提供經(jīng)確認的稀釋程序。

10.【檢驗方法的局限性】

說明檢測結果僅供臨床參考，不能單獨作為確診或排除病例的依據(jù);說明可能對試驗結果產(chǎn)生影響的因素，說明該檢驗方法的局限性。

（六）質量管理體系文件

申請人應當在申請注冊時提交與產(chǎn)品研制、生產(chǎn)有關的質量管理體系相關資料。詳述產(chǎn)品的生產(chǎn)過程，提供生產(chǎn)工藝流程圖。明確環(huán)孢霉素和他克莫司檢測試劑的產(chǎn)品反應及檢測原理和過程，標明主要控制點與項目及主要原材料、采購件的來源及質量控制方法。

如適用，應當提供擬核查產(chǎn)品與既往已通過核查產(chǎn)品在生產(chǎn)條件、生產(chǎn)工藝等方面的對比說明。

三、參考文獻

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[3]醫(yī)療器械說明書和標簽管理規(guī)定[Z].

[4]體外診斷試劑分類規(guī)則[Z].

[5]關于發(fā)布免于臨床試驗體外診斷試劑目錄的通告[Z].

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[7]關于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的通告[Z].

[8]接受醫(yī)療器械境外臨床試驗數(shù)據(jù)技術指導原則[Z].

[9]體外診斷試劑說明書編寫指導原則[Z].